[发明专利]重组人寡腺苷酸合成酶-1的制备方法

说明书

技术领域

本发明一般的涉及重组人寡腺苷酸合成酶的制备方法，特别的涉及重组人寡 腺苷酸合成酶-1的制备方法。

背景技术

慢性病毒性肝炎(HBV)是全球性的重大疾病，每年有50-120万人死于该 病及由其引起的肝硬化和肝癌等。作为一线药物，虽然干扰素α(interferonα， IFNα)在HBV的治疗中具有抗病毒及免疫调节的双重作用，但临床上只有 25％-50％的HBV患者使用IFNα治疗有效。因此如何在早期通过IFNα作用原理 预测IFNα治疗HBV的疗效，从而确定IFNα适宜治疗HBV患者的对象，正确 指导临床用药就显得十分关键。

2’，-5’寡腺苷酸合成酶(2’，5’-Oligoadenylate synthetase，OAS)，简称寡腺苷 酸合成酶(OAS)，是Kerr等在IFNα处理过的细胞提取液中发现的酶。经研究 发现OAS的激活或生成是IFNα在治疗HBV的过程中发生药理作用的重要信号 通路，因此其高低水平可用于判断IFNα是否适宜于特定HBV患者的治疗。

IFNα处理人细胞，主要诱导产生OAS1(40/46kDa)、OAS2(69/71kDa)和 OAS3(100kDa)三种类型OAS蛋白。在OAS1、OAS2、OAS3基因的5’区域， 包含一个干扰素激活反应元件(ISRE)。

OAS1有两种亚型，分子量分别为40和46kDa，均具有相同的N端346个 氨基酸，称为一个OAS单位。40kDa OAS1C末端包含18个氨基酸，而46kDa 蛋白则有54个氨基酸的延伸。

OAS2有分子量分别为69和71kDa的两种亚型，它们N端有683个氨基酸 的同源序列，包含两个OAS单位，与OAS1的346个氨基酸OAS单位相比，分 别有41％和53％的同源性，分别还有4和44个不同氨基酸序列延伸。干扰素剂 量依赖性诱导，至少可能产生4.5、3.9、3.3、2.8kb四种mRNA转录形式。其中 3.3kb mRNA编码71kDa OAS2，其他三种具有不同的3’末端，但同样编码69kDa OAS2。

与OAS1和OAS2不同的是，OAS3由7kb大小的mRNA编码，只有一种 亚型，包含三个OAS单位，与OAS1相比，有42％，47％和60％的同源性。

OAS基因家族簇生于人12号染色体上的一段130kb的区域内，它们具有相 同的转录方向，按照5’-OAS1-OAS3-OAS2-3’的顺序排布。同时，在人12 号染色体上还存在一段编码P59大小，与OAS1序列具有同源性的蛋白，该蛋白 与OAS1和OAS2均可以和抗OAS3多克隆抗体发生交叉抗原抗体结合反应。但 是该蛋白没有催化活性，称为OAS类似蛋白(OASL)。

虽然，IFNα可诱导产生各种类型的OAS蛋白，但是，在不同的细胞中，可 能存在不同的细胞因子调节各种类型及其亚型的表达，所以各类型及其亚型存在 表达差异。但是总体来说，OAS1在三种类型的OAS中在人体内表达量是最高 的，分布也是最广的。

在IFNα和细胞膜上的受体作用下，细胞合成大量无活性的OAS，当有双链 RNA或者具有微二级结构的单链RNA存在时，OAS被激活而具有催化活性， 它以ATP为底物，催化合成2’-5’寡腺苷酸(2-5A)，2-5A特异性结合并激活 核酸内切酶(RNAse L)降解病毒的mRNA及细胞的RNA，从而发挥抗病毒的 作用。临床研究表明通过在用药前后检测OAS活性在一定程度上可以预测患者 使用IFN治疗的疗效，从而指导临床合理用药。

目前OAS的活性检测多采用放射免疫的方法，但该方法存在繁琐、费时、 花费高的缺点，因此在临床推广应用上有一定的困难。而采用ELISA的方法， 则可克服这些缺点，从而可通过检测患者体内OAS含量水平而推算体内OAS活 性，从而为IFNα的临床用药提供切实的依据。