[发明专利]前列腺分泌蛋白94/57作为卵巢癌、乳腺癌早期临床诊断生物标记物的方法

说明书

[发明领域]

本发明所属生物技术及医学领域，具体为涉及一种预示、诊断卵巢癌、乳腺癌的早期临床检测方法。 

[技术背景]

癌症是威胁人类健康最严重的疾病之一。尽管近年来在其治疗、诊断领域取得了一系列进展，然而癌症依然是死亡率极高的一种疾病。早期诊断率低，丧失最佳治疗时机，是导致癌症疗效差及死率高的主要原因。因此提高癌症的早期诊断率，进而及早治疗是战胜该疾病的有效手段之一。大部分癌症患者在疾病早期没有明显的临床症状，而一旦出现明显症状则已进入中、晚期。因此癌症的早期诊断，尤其是在出现明显症状之前的诊断具有非常重要的意义。 

研究表明大部分癌症的发生是由于人体特定基因的异常表达或者异常关闭而引起的，而其中部分基因的异常变化是癌症发生的最早期事件，其能够在病人产生症状之前而发生。因此这些特定基因的异常变化可以作为癌症早期诊断的生物标记物。应用这些标记物，再结合常规的临床诊断方法可以快速有效的确诊疾病，从而为癌症患者的及早治疗赢得最佳时机。 

前列腺分泌蛋白94是一个含有94个氨基酸的小蛋白(其还有一个同基因异构体，含有57个氨基酸)，主要由前列腺分泌，是前列腺分泌最丰富的三大蛋白之一。一些研究表明该蛋白的表达量在前列腺癌症病人中显著降低，从早期病人到中、晚期病人，患者呈递减的趋势，以至于在晚期患者中，该蛋白的表达量完全消失，所以该蛋白是前列腺癌症患者临床诊断的一个潜在的生物标记物。同时，一些研究还表明，该蛋白具有抑制前列腺肿瘤细胞生长、杀死癌 细胞的功能。另外，据最新的研究结果表明，编码该蛋白的基因，是一个前列腺癌症的敏感基因，在该基因启动子的调控区存在一个单碱基突变，该突变会导致其蛋白表达量下降，从而使携带突变的个体成为前列腺癌证的易感患者。而且相关研究显示，许多前列腺癌症患者都携带该单碱基突变。因此该基因在前列腺癌症的发生、发展、以及治疗过程中具有重要的潜在作用，而且是具有重要意义的一种潜在的检测前列腺癌症的生物标记物。由于大部分基因的异常变化具有癌症类型特异性，因此该基因是否在其他类型癌症的发生过程中具有生物学功能，还没有进行过相关的研究。 

[发明内容]

本发明通过实验表明：前列腺分泌蛋白94/57的表达量在卵巢癌患者的样品中显著升高，其表达量(包括mRNAs和蛋白)比正常人表达量要高出2至5倍。尤其是在早期的患者样品中。由此推测前列腺分泌蛋白94/57在卵巢癌早期患者中显著升高，其可以作为一种预示、诊断卵巢癌早期检测潜在的生物标记物。 

本发明通过试验表明：前列腺分泌蛋白94/57的表达量(包括mRNAs和蛋白)在乳腺癌患者的样品中显著降低，甚至于完全消失以至于检测不到。尤其是在早期的患者样品中。据此推测前列腺分泌蛋白94/57在乳腺癌早期患者中异常降低，其可以作为一种预示、诊断乳腺癌早期检测潜在的生物标记物。 

[具体实时方式] 

通过下述实施例对本发明作进一步说明。 

一：前列腺分泌蛋白94/57基因的mRNAs及蛋白水平在卵巢癌早期患者中显著 升高。 

1)前列腺分泌蛋白94/57基因的mRNAs水平，在卵巢癌患早期者中显著升高。取卵巢癌患者的肿瘤组织样及正常人的卵巢组织样进行处理(提取mRNAs，反转录)，然后通过实时定量-PCR检测前列腺分泌蛋白94/57基因的mRNAs水平。结果表明：在卵巢组织样品中，卵巢癌早期患者的前列腺分泌蛋白94/57mRNAs水平是正常人的约6倍(见表1)。 

2)前列腺分泌蛋白94/57基因的蛋白水平，在卵巢癌早期患者中显著升高。 

a)取卵巢癌患者的肿瘤组织样及正常人的卵巢组织样进行处理(粉碎、裂解全蛋白)，然后通过Western Blot检测前列腺分泌蛋白94/57基因的蛋白水平。结果表明：在卵巢组织样品中，卵巢癌早期患者的前列腺分泌蛋白94/57的蛋白水平是正常人的约3.2倍(见表2)。 

b)取卵巢癌患者的血样及正常人的血样进行处理(分离血清、裂解全蛋白)，然后通过Western Blot检测前列腺分泌蛋白94/57基因的蛋白水平。结果表明：在血液样品中，卵巢癌早期患者的前列腺分泌蛋白94/57的蛋白水平是正常人的约2倍(见表3)。 

表1：前列腺分泌蛋白94/57基因的mRNAs水平在卵巢癌病人及正常人组织样中的比较 

表2：前列腺分泌蛋白94/57基因的蛋白水平在卵巢癌病人及正常人组织样中的比较