[发明专利]谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的检测方法及检测用固相萃取柱

说明书

技术领域

本发明属于色谱分析技术领域，具体涉及一种谷物中有毒有害化学物质的色谱分析检测方法及检测用固相萃取柱（SPE小柱）。

背景技术

单端孢霉烯族化合物广泛存在于多种谷物及其制品中，例如比较典型的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）与雪腐镰刀菌烯醇（nivalenol，N1V），这两种物质是由镰刀菌产生的一类次级代谢产物。DON又称呕吐毒素，人和动物在食用被该毒素污染的食品或饲料后可产生广泛的毒性效应，常引起呕吐、头痛、发热和恶心。1998年，国际癌症研究机构（IARC）公布的评估报告中，DON被列为第3类致癌物。近年来研究表明，DON与人类食管癌、IgA肾病、胃癌、骨关节病等有关。NIV具有与DON相似的毒性，虽然其污染率与毒性相对较低，但也广泛存在于多种农作物中，危害性不容忽视。DON、NIV不仅污染粮食谷物，也可污染粮食制品，因其在世界范围内具有较高的污染率而引起人们的普遍关注，各国都制定了严格的限量标准，我国谷物中DON的限量标准为1.0mg/kg。

目前，谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的测定方法有薄层色谱法（TLC）、酶联免疫吸附法（ELISA）、气相色谱（GC-ECD）、气质联用（GC-MS）和高效液相色谱法（HPLC）、液质联用（HPLC-MS）等，其中GC-ECD、GC-MS和HPLC-MS等方法被认为是检测此类毒素高灵敏度的方法，但GC-MS和HPLC-MS的检测用仪器昂贵。此外，在现有国内外文献有关单端孢霉烯族毒素化合物的检测报道中，样品的提取、净化步骤也较为繁琐，需要用到大量的有毒有害性有机试剂（如三氯甲烷、乙醚、石油醚等），而且现有的检测方法往往还需要用到Mycosep多功能净化柱、Sep-Pak、 Florisil柱等费用较为昂贵的SPE净化小柱，现有的检测方法不仅容易对环境造成污染，而且增加了检测成本和检测费用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种结构简单、成本低、低碳环保的用于检测谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的固相萃取柱，还提供一种检测步骤简单、检测精度高、检测成本低的谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种用于检测谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的固相萃取柱，所述固相萃取柱的本体包括一过滤管，该过滤管的顶端开口且底端开有滤孔，过滤管管底垫有滤纸，滤纸上填充有玻璃纤维，玻璃纤维上装填有萃取剂，萃取剂上覆盖有玻璃纤维；所述萃取剂主要由质量比为9∶（1.5～2.5）∶（5.0～6.0）的氧化铝、活性碳粉和二氧化硅组成。

上述本发明的技术方案中，所述单端孢霉烯族毒素化合物优选包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇和/或雪腐镰刀菌烯醇。

上述本发明的技术方案中，所述过滤管优选采用注射针管。

作为一个总的技术构思，本发明还提供一种谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的检测方法，包括以下步骤：

（1）提取：利用乙腈水溶液对待测试样进行提取得提取液，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数为80%～90%；

（2）过柱：将步骤（1）中的提取液过权利要求1所述的固相萃取柱，将过柱后的滤液在45℃下氮吹浓缩至干得样品残渣；

（3）衍生：将准备好的衍生剂加入步骤（2）后的样品残渣中，涡旋振摇后室温下反应12min～20 min，再加入正己烷涡旋混匀，加水剧烈振荡，静置分层后取上层溶液用无水硫酸钠脱水，上气相色谱仪分析；

（4）测定：根据气相色谱分析测得的峰面积和已经绘制好的标准曲线定出待测试样中单端孢霉烯族毒素化合物的含量n，最后根据待测试样的稀释倍数F即可换算出实际谷物样品中单端孢霉烯族毒素化合物的含量N。

上述的谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的检测方法，所述单端孢霉烯族毒素化合物优选包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇和/或雪腐镰刀菌烯醇。

上述的谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的检测方法中，优选的，所述衍生剂（TBT）主要是由体积比为3∶3∶2的三甲基硅烷咪唑（TMSI）、N，O一双三甲基硅基乙酰胺（BSA）和三甲基氯硅烷（TMCS）组成。

上述的谷物中单端孢霉烯族毒素化合物的检测方法中，所述气相色谱仪的工作参数优选为：检测器温度为250℃～300℃，进样口温度为230℃～280℃，载气为高纯氮气，载气流速为1.0 mL/min～2.5 mL/min，分流比为（1～10）∶1，电流为1.0nA，尾吹气流量为40mL/min。

与现有技术相比，本发明的优点在于：