[发明专利]一种呼吸道合胞病毒的检测方法

权利要求书

1.一种呼吸道合胞病毒的检测方法，其特征在于：用子宫内膜腺癌细胞系JEC做呼吸道合胞病毒分离工具，再用间接免疫荧光法检测病毒。

2.根据权利要求1所述一种呼吸道合胞病毒的检测方法，其特征在于：包括以下具体步骤：

（1）培养JEC细胞，JEC细胞复苏后接种于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中，置于相对湿度为95﹪～98﹪，37℃，5﹪CO₂及37℃条件下培养；每2～3d换液1次，4～5d传代1次；将生长良好的JEC细胞用0.25﹪胰酶消化后制成细胞悬液，以1×10⁵个/孔的密度接种于96孔培养板，0.1 ml/孔，置于37℃、5﹪CO₂培养箱中培养，次日待细胞贴壁后感染病毒；

（2）RSV感染JEC，用PBS反复冲洗96孔培养板三次，吸干孔内剩余PBS液，每孔接种40ul咽拭子液（放入含双抗的无菌试管内处理2h---8h），对照孔接种PBS液40ul，感染1---2h后用无血清RPMI1640培养液冲洗96孔培养板三次，吸干孔内剩余液体，每孔加入0.1ml维持液，(含2%小牛血清的RPMI1640培养液)，每8---12h在倒置显微镜下观察一次是否出现细胞病变效应，如果72h未见细胞病变效应再盲传一次；

（3）间接免疫荧光法检测RSV ，病毒感染72h后，弃去孔内培养液，PBS反复冲洗96孔培养板三次，然后用冷丙酮固定10分钟，2% Trition-100打孔5分钟，PBS液冲洗三次，3min/次，每孔加入1:2 RSV抗体5ul，湿盒37℃孵育45分钟，PBS液冲洗三次，3min/次，每孔加入1:30羊抗鼠IgG FITC二抗10ul，湿盒37℃孵育45分钟，PBS液冲洗三次，3min/次，倒置荧光显微镜观察胞内及包膜绿色荧光，如感染组出现明显荧光颗粒，则有RSV的存在。