[发明专利]一种兔耳风苷B的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药有效成分分离制备领域，涉及一种兔耳风苷B的制备方法。

背景技术

兔耳风苷B（Ainsliaside B）是一种萜苷类化合物，分子式为C₂₁H₂₈O₉，分子量为424.45，为无色针晶(甲醇)，mp157～161℃。主要存在于菊科(Compositae)深裂兔耳风的全草中。其分子结构式如下：

药理研究表明，兔耳风苷B具有细胞毒活性，对L-5178Y白血病细胞的ID50为39.0μg/ml。经文献检索，尚未发现制备高含量兔耳风苷B的方法报道。

发明内容

本发明旨在提供一种简单、适用于工业生产、产品纯度高、成本低廉的制备兔耳风苷B的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

a.将深裂兔耳风全草粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，通入85-95%甲醇作为夹带剂参与萃取，收集萃取物；

b.萃取物采用硅胶柱层析，氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，高效液相监测，收集相应流分，减压浓缩，得到浓缩液；

c.浓缩液注入高速逆流色谱仪，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，紫外检测器检测，收集目标成分，浓缩，真空干燥即得兔耳风苷B单体。

所述步骤a中超临界CO₂萃取温度为28-40℃，萃取压力为20-30MPa，CO₂流量为15-25L/h，萃取时间为2-4h，分离釜温度为20-30℃，压力为6-9MPa，夹带剂用量占总萃取溶剂的体积百分比为3-5%。

所述步骤b中硅胶粒度为100-300目，洗脱剂氯仿-甲醇洗脱比例1:2-12。

所述步骤c中正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体积比为1-3:2-4:3-7:1-5，上相为固定相，下相为流动相。

本发明的有益效果是：

本发明超临界萃取，萃取过程耗能低，萃取剂CO₂来源丰富、清洁无污染；硅胶柱层析粗分和高速逆流色谱分离，分离时间短，有机试剂用量少，制备量大。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

取干燥的深裂兔耳风全草3kg，粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，通入90%甲醇作为夹带剂参与萃取，夹带剂用量占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取温度为38℃，萃取压力为22MPa，CO₂流量为20L/h，萃取时间为3h，分离釜温度为22℃，压力为6.5MPa，收集萃取物，采用硅胶柱层析，依次用1:2、1:7、1:12氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，高效液相监测，收集相应流分，减压浓缩，得到浓缩液，将浓缩液注入高速逆流色谱仪，以体积比为3:3:7:3正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，控制流动相流速为1.5ml/min，紫外检测器检测，收集目标成分，浓缩，真空干燥即得兔耳风苷B单体，经HPLC检测，产品纯度为98.7%。

实施例2：

取干燥的深裂兔耳风全草3kg，粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，通入90%甲醇作为夹带剂参与萃取，夹带剂用量占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取温度为32℃，萃取压力为25MPa，CO₂流量为18L/h，萃取时间为3h，分离釜温度为25℃，压力为8MPa，收集萃取物，采用硅胶柱层析，依次用1:3、1:7、1:11氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，高效液相监测，收集相应流分，减压浓缩，得到浓缩液，将浓缩液注入高速逆流色谱仪，以体积比为3:2:5:3正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，控制流动相流速为2ml/min，紫外检测器检测，收集目标成分，浓缩，真空干燥即得兔耳风苷B单体，经HPLC检测，产品纯度为98.1%。

实施例3：