[发明专利]鉴定H3亚型禽流感病毒的PCR引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定H3亚型禽流感病毒的PCR引物对及其应用。

背景技术

禽流感是由禽流感病毒引起的禽类病毒性传染病。H3亚型禽流感病毒是流行于水禽的主要亚型之一；近年来发现我国大部分地区鸡群存在H3亚型流感病毒的血清阳性抗体，且有从鸡群中分离到H3亚型禽流感病毒的报道，说明H3亚型禽流感病毒已经感染鸡，并进入鸡群；此外，流行病学调查显示，H3亚型禽流感病毒与鸡群中的主要流行亚型(H5和H9亚型)病毒发生了基因交换产生了新型流感病毒，并引起鸡群发病；而且，H3亚型禽流感病毒曾经是人间流感大流行毒株的供体。因此，建立一种针对H3亚型禽流感病毒的检测试剂，既可满足水禽和鸡群禽流感病毒监测的需要，又可为人间流感大流行的预警提供一种有效的检测方法。

传统的检测方法，如病毒分离、血凝抑制试验等，费时、费力，不能做出快速而及时的诊断。现代的分子生物学诊断技术能从分子水平揭示多种疾病，如高致病性禽流感，也能从分子水平揭示潜在高致病性禽流感毒株的差异，从而实现早期而快速地诊断疾病。目前还没有一种针对H3亚型禽流感病毒进行检测的PCR引物及方法，以用于流感病毒的流行病学监测和诊断。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定H3亚型禽流感病毒的PCR引物对及其应用。

本发明所提供的PCR引物对，是由两条单链DNA组成，所述两条单链DNA是序列表中序列1所示的单链DNA和序列表中序列2所示的单链DNA。

本发明所提供的PCR引物对可用于制备诊断或辅助诊断H3亚型禽流感的试剂或试剂盒，或用于制备鉴定或辅助鉴定H3亚型禽流感病毒的试剂或试剂盒。

含有所述PCR引物对的试剂或试剂盒均属于本发明的保护范围。

上述PCR引物对的制备方法也属于本发明的保护范围。该制备方法具体可包括将所述PCR引物对中所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

所述鉴定或辅助鉴定H3亚型禽流感病毒的试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。该制备方法具体可包括如下步骤：将所述PCR引物对中所述两条单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种物质包装在同一试剂盒内：DNA聚合酶和4种dNTP(dATP，dTTP，dCTP和dGTP)。

本发明所提供的PCR引物对可检测H3亚型禽流感病毒，尤其适合检测H3N8亚型的禽流感病毒。

本发明所提供的PCR引物对可检测不同来源的H3亚型禽流感病毒，尤其适合检测鸭源的H3亚型禽流感病毒。

本发明所提供的引物对用于检测H3亚型禽流感病毒的特异性高，灵敏度可达1EID₅₀/100μl，与病毒分离和血凝抑制实验等常规实验方法的鉴定结果相比的符合率为100％；不仅可以对待测病禽的口腔拭子、泄殖拭子进行检测，还可检测病禽尿囊液，操作简单、容易推广，便于基层操作和应用，可成为H3亚型禽流感病毒疫病诊断和流行病学调查的有用检测工具。

附图说明

图1为引物对H3V的特异性检测。其中，M为Maker，1-6分别为感染H3亚型禽流感病毒A/Duck/BeiJing/33/2004、A/Duck/BeiJing/40/2004、A/Duck/BeiJing/44/2004、A/Duck/BeiJing/56/2005、A/Duck/BeiJing/59/2005和A/Duck/BeiJing/61/2005的样品，7-19分别为感染H5N1亚型禽流感病毒A/Chicken/Huabei/202/2010、H5N1亚型禽流感病毒A/tree sparrow/Jiangsu/1/2008、H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Huabei/7/2009、H9N2亚型禽流感病毒A/Quail/HongKong/G1/1997、H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Beijing/3/1999、H9N2亚型禽流感病毒A/Duck/ShangDong/2CP/2010、H4N6亚型禽流感病毒A/Duck/ShangDong/1/2010、H6N1亚型禽流感病毒A/Duck/Beijing/1/2003、新城疫病毒HG/Beijing/2009、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、呼肠孤病毒(REO)的样品，19为阴性鸡胚尿囊液对照。