[发明专利]双标记核酸恒温扩增方法及检测试纸条

权利要求书

1.一种双标记核酸恒温扩增方法，其特征在于：根据检测目标设计LAMP 引物，进行内引物、外引物和环引物的合成；用生物素和荧光素分别标记两种内引物，或分别标记两种环引物，或分别标记一种内引物和一种环引物，将标记引物加入LAMP反应体系中恒温扩增，得到双标记核酸恒温扩增产物。

2.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于：所述标记是标记内引物各引物的5’端。

3.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于：所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明或四甲基异硫氰酸罗丹明。

4.根据权利要求1-3任一项所述的扩增方法，其特征在于：所述恒温扩增是在59-65℃温度下、恒温扩增5-20min。

5.一种含有双标记核酸恒温扩增产物的检测试纸条，含有支撑层、吸附层，支撑层为不吸水薄片条，吸附层粘贴于支撑层上，所述吸附层从测试端依次为测试端纤维层、纤维素膜层和手柄端吸水材料层，其特征在于：所述纤维素膜层含有权利要求1所述的双标记核酸恒温扩增产物，用生物素亲和蛋白及荧光素抗体分别在纤维素膜层上印制检测印迹和对照印迹，或用生物素亲和蛋白及荧光素金标抗体分别在纤维素膜层上印制检测印迹和对照印迹，检测印迹和对照印迹平行排列为“                                                ”。

6.根据权利要求5所述的检测试纸条，其特征在于：所述不吸水薄片条为硬质塑料片条或不吸水硬纸片条，所述纤维素膜层是用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成，所述手柄端吸水材料层是用吸水纸制成，所述测试端纤维层是用玻璃棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成。

7.根据权利要求5所述的检测试纸条，其特征在于：所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明或四甲基异硫氰酸罗丹明。

8.根据权利要求5-7任一项所述的检测试纸条，其特征在于：所述测试端吸附纤维层、吸水材料层上均覆盖有保护膜，在测试端纤维层的保护膜上印制有样品标记线，该标记线距离测试端0.5cm。

9.权利要求5所述的检测试纸条在检测各种致病性微生物或病原体的特异性基因中的应用。