[发明专利]一种筛选螺旋藻品系生产性状优劣的方法

权利要求书

1.一种筛选螺旋藻品系生产性状优劣的方法，其特征在于，是对被鉴定螺旋藻品系的mreB基因进行测序，并与已知钝顶螺旋藻品系Sp-4、Sp-12、Sp-17、Sp-18、Sp-37一起进行基于mreB基因序列的差异位点数分析及系统发生树构建；如果被鉴别螺旋藻品系与Sp-4、Sp-12和Sp-17的mreB基因序列聚成一类，表示被鉴定螺旋藻品系生产性状优良能够应用于大规模养殖生产；如果被鉴别螺旋藻品系与Sp-18、Sp-37的mreB基因序列聚成一类，则表示被鉴定螺旋藻品系生产性状劣不能应用于大规模养殖生产。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)PCR引物设计与扩增

利用Primer 5.0引物设计软件进行PCR扩增引物的设计，得到上游引物PF：5’-ATGGGCTTTTTTAATCGCTTTTC-3’，下游引物PR：5’-CTACGGATTTTGTGATTGTCGTGTA-3’；

扩增的反应条件为：25μL PCR反应体系中含引物PF和PR各0.5μmol/L，4种dNTP：dATP、dGTP、dCTP和dTTP各1μmol/L，2.5U的Taq DNA聚合酶，10倍的PCR缓冲液2.5μL，50ng基因组DNA；反应程序：94℃5min；94℃30s，44℃1min，72℃1.5min，31个循环；72℃8min；

(2)PCR产物的克隆及测序

将经DNA凝胶回收试剂盒回收纯化的PCR产物连接到pMD18-T载体上，转化感受态E.coli TG1，蓝白斑法筛选阳性克隆，提取质粒并作酶切鉴定，将含有目的片段的重组质粒进行测序，分别测得Sp-4、Sp-12、Sp-17、Sp-18、Sp-37和待鉴定螺旋藻品系基因组DNA的mreB基因序列；

(3)序列比对与系统发生树构建

对上述Sp-4、Sp-12、Sp-17、Sp-18、Sp-37和待鉴定螺旋藻品系的多重序列比对采用Clustal X 1.81软件，其系统发生树的构建采用Phylip 3.65软件包；以mreB基因序列作为一种分子标记与已知螺旋藻品系进行比对，由此鉴别螺旋藻生产性状的优劣。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在扩增反应中选用的试剂和仪器为：Taq DNA聚合酶和琼脂糖为上海生工生物工程公司产品；克隆载体pMD18-T，以及dNTP、DNA限制性内切酶、T4 DNA连接酶均为日本TaKaRa公司产品；DNA凝胶回收试剂盒购于上海英骏公司；PCR引物由上海英骏公司合成，其它试剂均为分析纯，序列扩增用美国Hybaid公司的Thermal Cycler PCR仪，测序用美国ABI公司的3730型测序仪。