[发明专利]一种铁皮石斛腋芽的快速繁殖技术

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的快速繁殖技术，具体为一种铁皮石斛腋芽的快速繁殖技术，属生物技术领域。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)或(Dendrobium candidum Wall ex Lind.)，又名黑节草，系兰科(Orchidaceae)。石斛属多年生附生草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生。其新鲜茎或干燥茎入药，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。《中国药典》规定铁皮石斛在烘软干燥后可加工成耳环石斛即铁皮枫斗。其味甘淡，性微寒，用于阴伤沣亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚弱，目暗不明，为中国十大仙草之一。在现代的药理研究中，据报道铁皮石斛还具有降血糖、增强抵抗力及抗癌作用。

铁皮石斛的种子极为细小，胚胎发育不完全，无胚乳组织，在自然状态下发芽率极低，有性繁殖极为困难。生长于悬崖峭壁之阴处，自然产量极为稀少，由于价值不菲，长期以来一直处于过度采挖状况，其野生资源已濒临绝种，被国家列为2级保护植物，野生资源远远不能满足药材市场的需要。人工繁殖主要靠无性繁殖，从根部不断分蘖或从上部茎节处生根长出新的植株，但是产量很低，仍然离市场的需求相差甚远。为了做到保护与开发并举，通常利用组织培养的方法快速繁殖获得种苗，为人工栽培提供种源。在前人对铁皮石斛快速繁殖的报道中，多集中以种子、茎尖、茎段等为外植体，并通过原球茎的增殖与分化来繁殖种苗。其中存在的问题是用种子繁殖的后代有可能产生变异；茎尖作为外植体会散失母株，茎段由于自身带菌严重，会消毒不彻底。并有研究表明由于石斛的特殊性，在石斛的组织培养中，外植体的选择是十分关键的因素，不同的取材部位和时期，培养的结果也不一样，并且其他外植体形成的试管苗比种子试管苗成株快，茎粗，苗壮，易成活。而直接取材于腋芽作为外植体，不仅取材更方便，并且不伤母株的茎，能保留茎的完整性。目前对铁皮石斛腋芽直接培养诱导成苗的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种铁皮石斛腋芽的快速繁殖技术，从而建立丛生芽途径的高效快速繁殖体系，使通过快速繁殖获得的植株能与母株保持遗传上的一致性，为铁皮石斛野生居群的恢复提供材料，达到保护野生资源的目的。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现。

一种铁皮石斛腋芽的快速繁殖技术，具体步骤如下：

1)腋芽成活生长

当铁皮石斛植株茎节间新长出腋芽长0.5～1.0cm时，用刀片小心切下完整腋芽，自来水冲洗干净。在超净工作台上，材料先用75％酒精浸泡30s后，0.1％升汞消毒10min，无菌蒸馏水浸洗4次，每次5min，多余水分用无菌滤纸吸干。最后将材料接种在培养基上。以MS为基本培养基，分别添加0.3mg/L的NAA、1.0mg/L的6-RA，3％的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值为5.5～6.0，高压灭菌20～25min。培养室温度(25±3)℃，以植物培养灯为光源，光照强度2000lx，每天光照12h。培养10天就可见腋芽变粗、伸长，60天后长度可达1.8～2.0cm，长出5片叶，并且成活率为100％。

2)丛生芽的诱导与增殖

在腋芽继续伸长生长的同时，其基部不断有新的丛生芽发生。将腋芽移栽到增殖培养基上进行丛生芽的诱导和增殖。该培养基配方为MS、1.0mg/L的NAA、2.5mg/L的BA、20％的香蕉汁、3％的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值为5.5～6.0，高压灭菌20～25min。培养室温度(25±3)℃，以植物培养灯为光源，光照强度2000lx，每天光照12h。培养160d，增殖倍数可达18.0，随着培养时间的延长，增殖倍数也呈逐渐提高趋势。

3)丛生芽生根及生长成苗

将丛生芽转移到生根培养基上进行生根培养，生根培养基为1/2MS、0.2～0.5mg/L的NAA、20％的香蕉汁和2.0‰的活性碳混合。培养30d，丛生苗基部的气生根发达，根系数量多达20～30条，且在根系上有白色粉末状，瓶苗叶片光亮，茎粗，节多，有利移栽。

4)炼苗移栽

(1)炼苗：将生根瓶苗在移栽前的7～10天放在温室大棚中培养，炼苗。

(2)组培苗移栽：组培苗移栽基质为苔鲜、松树皮、木屑与碎石块及粗河沙混合。用甲基托布沣粉剂600倍稀释液将移栽基质喷洒消毒2天后再移苗。

由此方法移栽成活率高达95％以上。