[发明专利]一种水通道蛋白基因在构建与Hpa1Xoo相互作用的互作载体中的应用

权利要求书

1.SEQ ID NO.1所示的水通道蛋白基因PIP1；4在构建其表达产物与Hpa1_Xoo相互作用的互作载体中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为酵母双杂交系统中使用的重组载体pGBKT7::PIP1；4，该重组载体是通过以拟南芥生态型Col-0基因组DNA为模板，利用特异性上、下游引物SEQ ID No.6和SEQ ID No.7克隆SEQ ID NO.1所示的PIP1；4基因，经Nde I/BamH I双酶切后插入到pGBKT7质粒的Nde I/BamH I酶切位点之间所得。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为酵母双杂交系统中使用的重组载体pGADT7::PIP1；4，该重组载体是通过以拟南芥生态型Col-0基因组DNA为模板，利用特异性上、下游引物SEQ ID No.6和SEQ ID No.7克隆SEQ ID NO.1所示的PIP1；4基因，经Nde I/BamH I双酶切后插入到pGADT7质粒的Nde I/BamH I酶切位点之间所得。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为膜酵母双杂交系统中使用的重组载体pBT3-N::PIP1；4，该重组载体是通过以权利要求3所述的重组载体pGADT7::PIP1；4为模板，利用特异性上、下游引物SEQ ID No.12和SEQ ID No.13克隆得到PIP1；4基因，Sfi I酶切后连接到pBT3-N质粒的Sfi I酶切位点所得。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为膜酵母双杂交系统中使用的重组载体pBT3-STE::PIP1；4，该重组载体是通过以权利要求3所述的重组载体pGADT7::PIP1；4为模板，利用特异性上、下游引物SEQ ID No.14和SEQ ID No.15克隆得到PIP1；4基因，Sfi I酶切后连接到pBT3-STE质粒的Sfi I酶切位点所得。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为Pull-down assay中使用的表达水通道蛋白PIP1；4的重组载体pPICZ-A::PIP1；4，该重组载体是通过以权利要求3所述的重组载体pGADT7::PIP1；4为模板，利用特异性上、下游引物SEQ ID No.16和SEQ ID No.17克隆得到PIP1；4基因，经EcoR I/Kpn I酶切后连接到酵母胞内表达载体pPICZ-A上的EcoR I/Kpn I酶切位点之间所得。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为Pull-down assay中使用的表达水通道蛋白PIP1；4的重组载体pPICZα-A::PIP1；4，该重组载体是通过以权利要求3所述的重组载体pGADT7::PIP1；4为模板，利用特异性上、下游引物SEQ ID No.18和SEQ ID No.19克隆得到PIP1；4基因，经EcoR I/Kpn I酶切后连接到酵母胞外分泌表达载体pPICZα-A上的EcoR I/Kpn I酶切位点之间所得。 

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的互作载体为BiFC杂交系统中使用的重组载体pCAMBIA1301::PIP1；4::YN，该重组载体是以pPLV17为模板，以SEQ ID No.24和SEQ ID No.25为引物扩增黄色荧光蛋白氮末端序列YN，将所得的YN使用Xba I和Pst I进行酶切并插入到pCAMBIA1301相应的酶切位点获得pCAMBIA1301::YN载体；以拟南芥生态型Col-0基因组DNA为模板，以SEQ ID No.28和SEQ ID No.29为引物扩增PIP1；4，将扩增的到得PIP1；4基因使用Kpn I和BamH I双酶切后插入到pCAMBIA1301::YN载体的Kpn I和BamH I酶切位点间得到的。