[发明专利]磁珠-微孔板法提取核酸试剂盒及其提取核酸方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于提取核酸的试剂盒及其提取核酸方法，具体涉及了一种磁珠-微孔板法提取核酸试剂盒及其提取核酸方法。

背景技术

核酸是一类生物信息高分子化合物，自它首次被从细胞中分离出来，经历了一百多年的历史，直至上个世纪中期以后科学家对核酸结构和功能才取得了飞跃的发展。核酸分为脱氧核糖核酸和核糖核酸，核苷酸是核酸的基本单位。DNA和RNA在动植物种都有存在，但一种病毒只含有一种核酸，DNA或RNA。核酸在整个分子生物学中的所具有的无可替代的作用，自分子生物学创立以来，一直是分子生物学研究的主要对象。因此，核酸的提取和分离纯化也是分子生物学各类实验不可缺少的一个环节。在临床诊断中，常从人体组织，如血清或血浆、组织切片中分离纯化核酸，然后用于疾病的诊断和组织配型。

传统的酚-氯仿法等化学方法提取核酸，该方法虽然提取的核酸得率高，纯度好，但要使用到酚和氯仿等有毒有害物质，操作过程要反复开管加液、离心、弃液，频繁更换离心管和吸咀，工作步骤冗长繁杂，致使提取工作效率低下。

随着纳米技术的发展，利用SiO₂（二氧化硅）包裹的纳米磁珠在一定条件下特异吸附核酸的特性，开发出了磁珠提取纯化核酸技术 ，该技术得到了广泛的应用。操作基本过程是样品中的核酸与磁珠充分混合使核酸吸附到磁珠后，与磁珠一起在磁场的作用下与溶液分离，经过几次洗涤后，用洗脱液使核酸与磁珠分离，磁珠再由磁场中从液相中分离出来，液相即为纯化的核酸溶液。所以磁珠法提取核酸该技术利用磁珠的物理特性提取纯化核酸，不使用有毒有害化学试剂，操作过程简单，不用频繁更换离心管和吸咀，不用离心，磁吸瞬间可以完成，核酸得率和纯度优于酚～氯仿法等化学方法。磁珠法较传统的酚-氯仿法等化学方法是革命性的技术革新。如公开号CN101684138A公开一种应用纳米磁珠纯化核酸的试剂盒，该试剂盒由裂解液、磁珠缓冲液、洗涤缓冲液1、洗涤缓冲液2、洗涤缓冲液3、洗脱缓冲液和平衡液组成；该发明提取核酸速度快、灵敏度高，并且比传统核酸纯化方法具有自动化升级的潜力，使得核酸提取的大规模集成化，均一性成为可行。但是现有的磁珠法提取核酸也存在以下缺点：1.由于在离心管中进行提取，需要反复开盖加液、盖盖混匀，再开盖弃液过程，当检测量为几十上百份样时，反复开盖极不方便。2.分子生物学检测样品用量一般为1～5微升,而常规一次提取量为50～100微升,与磁珠昂贵的成本比较，无疑存在较大的浪费。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供了一种操作简单、节约成本的磁珠-微孔板法提取核酸试剂盒及其提取核酸方法。

为了实现上述目的，本发明采取以下技术解决法案：一种磁珠-微孔板法提取核酸试剂盒，包括盒体和试剂，盒体包括磁力板和可拆卸微孔板，可拆卸微孔板由孔架和微孔两部分组成；微孔分单孔或多联孔安置在孔架上；试剂包括磁珠、裂解-结合液、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。

所述微孔的制作材料为聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯。

所述微孔的孔底为“U”形或“V”形，微孔的容积为400微升以上。

所述磁力板为长方形钕铁錋强磁片，形状、尺寸与可拆卸微孔板底部适配。

所述磁珠为SiO₂ 包裹的氧化铁纳米颗粒，所述裂解-结合液为异硫氰酸胍消化液，所述洗涤液A为75%无水乙醇水溶液，所述洗涤液B为无水乙醇，所述洗脱液为电导率≧18微西门子的纯水，即超纯水或双蒸水。

所述试剂盒提取核酸的样品为固体、液体或固-液混和物。

上述试剂盒中所有试剂均为工作液，可直接使用，磁珠液和裂解-结合液使用前充分摇匀；试剂盒在常温条件下储存和运输，磁珠液与磁板存放距离至少10cm以上，有效期一年；本发明试剂与器械配合使用，不建议与其它试剂或器械混用。

使用本发明试剂盒提取核酸的方法如下：

1.将样品与裂解-结合液放入离心管内充分作用后，在4000～10000转/分的转速下，离心5～15分钟；

2. 取上清液50～200微升/孔放入微孔板的微孔中，记录样品对应的孔号，并用8通道微量移液器向微孔加入磁珠5～10微升/孔；

3.将微孔板放在微量漩涡振荡器中充分混匀，静置5～10分钟，中间和最后各混匀1～2次，然后将微孔板板底扣入磁力板上，磁吸10～30秒后将磁力板和微孔板一起拿起，甩净孔内液体，管口向下在吸水纸上轻叩以吸干残留液体；