[发明专利]一种从松针中提取的α-蒎烯及其提取方法和在抗肿瘤中的应用

说明书

技术领域

    本发明涉及抗癌药物的提取制备领域，具体涉及一种从松针中提取的α-蒎烯及其提取方法和在抗肿瘤中的应用。

背景技术

    肝癌是影响人类健康的重大疾病，全世界每年患病人数超过100万，其死亡人数在肿瘤死亡人数中安排第三位。在我国，每年肝癌发病人数约35万,死亡人数约32万,发病率和死亡率均占肿瘤中的第二位 。目前，有可能治愈肝癌的治疗措施主要有两种：手术切除或肝移植，但由于发病隐匿、无明显症状、发现时已是肝癌中晚期，手术效果不佳；或由于缺少肝源而失去手术清除和肝移植机会。即使有机会实行“根治性”手术，肝癌的高复发、高转移特性仍然是医疗界的难题。经皮治疗、射频消融、动脉栓塞、化疗等姑息性治疗措施复发率高、长期生存率极低、治疗后5年生存率仅7% 。因此，为中晚期肝癌患者创造二期手术机会，防止肝癌术后复发和转移，已经成为目前肝癌治疗的关键。中药在抑制肿瘤细胞增殖、稳定瘤体生长、改善症状体征、减毒增效、预防复发、提高生存质量、延长生存期等方面具有独特的优势。从传统中药中寻找高效低毒的有效部位或成份治疗肝癌已成为研究热点,具有重要的研究价值和应用前景。

发明内容

    本发明的目的在于提供一种从松针叶中提取得到的抗癌组分。

    本发明另一目的在于提供上述抗癌组分的制备方法。

    本发明还有一个目的在于提供上述抗癌组分的应用。

    本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：

    一种从松针中提取的化合物——α-蒎烯，其结构式为：                                                。

本发明所述α-蒎烯的提取方法包括如下步骤：

（1）从松针嫩茎叶，阴干粉碎，水蒸气蒸馏提取松针油，取上层精油以无水乙醚溶解后，干燥得到松针油（松针（pine needle）为松科（pinacease）松属（pinus），药用植物的叶）；

（2）用蒸汽分馏法对松针油进行分离，将松针油的主要成分α-蒎烯和β-蒎烯分别提取出来。

作为一种优选方案，上述提取方法中，步骤（1）中所述将松针嫩茎叶粉碎至40~60目；所述水蒸气蒸馏时，固液比为1:8，提取时间为3h；所述干燥是使用无水硫酸钠进行的。

本发明所述α-蒎烯可以用于制备治疗肿瘤相关疾病的药物，尤其是治疗肝癌的药物。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

申请人的前期研究发现松针油能诱导宫颈癌和肝癌细胞凋亡，其作用机制与抑制端粒酶活性和诱导凋亡相关基因表达有关,提示松针油可能是一种新的抗肿瘤中药。松针油作为一种粗提物，含有多种成份。我们采用蒸气分馏方法对松针提取液（松针油）进行分离，得到了松针油的主要成份为α-蒎烯和β-蒎烯。据目前研究认为多种中药来源的烯类具有抗肿瘤作用，我们在体外针对松针油的两种组分的抗肿瘤作用进行了预实验。预实验结果显示，α-蒎烯能显著抑制肝癌Bel7402细胞的增殖，且其作用可能与阻滞细胞周期有关，流式细胞分析显示α-蒎烯作用后肝癌细胞被阻滞在G2/M期，但没有明显的细胞凋亡。而β-蒎烯没有明显抑制增殖和细胞周期阻滞作用。这些结果提示α-蒎烯可能是松针油中起抗肿瘤作用的活性成份。在此基础上本课题拟采用动物实验和免疫组化等分子生物学方法，通过体内外的研究，证实其抗肿瘤生长的作用和其抑癌的分子机制。我们的研究将为α-蒎烯在肝癌防治中的临床应用提供重要的参考资料和新的理论依据。

附图说明

    图1为松针油总离子流图；

    图2为α-蒎烯总离子流图；

    图3为β-蒎烯总离子流图；

    图4为α-蒎烯抑制肝癌Bel-7402细胞细胞的增殖；

图5为α-蒎烯对肝癌Bel-7402细胞CDC25C mRNA表达的影响；

图6为α-蒎烯对肝癌Bel-7402细胞细胞周期的阻滞作用，其中，A为对照组，B为α-蒎烯（1：800稀释）作用48小时；

图7为α-蒎烯对肝癌Bel-7402细胞细胞凋亡的影响；A：对照组；B：α-蒎烯（1：800稀释）作用48小时；

图8为α-蒎烯对裸鼠移植性肝癌抑制的影响；空白：对照组；对照：5-氟脲嘧啶对照组；实验：α-蒎烯干扰组。

具体实施方式

    以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

    实施例1  α-蒎烯的提取纯化