[发明专利]抗生素Pseudonocardian A和B及其制备方法和在制备抗菌、抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于工业微生物领域，具体涉及新的抗生素PseudonocardianA和PseudonocardianB及其制备方法和在制备抗菌、抗肿瘤药物中的应用。 

背景技术：

Deoxynyboquinone(DNQ)是一个已经人工合成的化合物，其结构如式(I)所示，该化合物具有显著细胞毒活性，在以产生活性氧自由基(ROS)为抗性机理的抗肿瘤药物中，该化合物表现出优异的特征-在缺氧条件下仍显示出较强活性，成药潜力巨大。与之结构相近的化合物SCH 538415活性较之弱10倍(Bair，J.S.；Palchaudhuri，R.；Hergenrother，P. J.，Chemistry and biology of deoxynyboquinone，a potent inducer of cancer cell death.J Am Chem Soc2010，132，(15)，5469-78.)。 

式(I) 

发明内容：

本发明的第一个目的是提供两种新的具有抗菌和细胞毒活性的化合物Pseudonocardian A和Pseudonocardian B。 

本发明的两种新的抗生素Pseudonocardian A和Pseudonocardian B，其结构如式(II)所示： 

式(II) 

其中当R＝H时为Pseudonocardian A，当R＝CH₃时为Pseudonocardian B。 

本发明的第二个目的是提供一种PseudonocardianA和Pseudonocardian B的制备方法。 

本发明的Pseudonocardian A和Pseudonocardian B是从假诺卡氏菌Pseudonocardia spSCSIO 01299的发酵培养物中制备分离得到的。 

本发明优选通过以下方法从假诺卡氏菌Pseudonocardia sp.SCSIO 01299的发酵培养物中制备得到PseudonocardianA和Pseudonocardian B，具体步骤如下： 

a)制备假诺卡氏菌SCSIO 01299的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏B； 

b)将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100∶0～0∶100进行梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比50∶1梯度洗脱下来的馏分Fr.1，再过LH-20凝胶柱，以氯仿/甲醇体积比1∶1作为流动相洗脱，后经过硅胶柱层析，用氯仿/甲醇体积比为20∶1作为流动相洗脱，再经ODS反相中压液相色谱(YMC*GELODS-A球型填料，120A孔径，50um粒径，40×2.5cm I.D.)，流速为15ml/min，以体积分数从0％～55％的甲醇/水梯度洗脱160min，收集体积分数40～45％的甲醇/水梯度洗脱下来的馏分，得到化合物Pseudonocardian A，收集体积分数50～55％的甲醇/ 水梯度洗脱下来的馏分，得到化合物Pseudonocardian B。 

所述的a)步骤的制备假诺卡氏菌SCSIO 01299的发酵培养物优选通过以下方法制备：将活化的假诺卡氏菌SCSIO 01299接入种子培养基中，28℃，200rpm，培养48h制得种子液，将种子液以10％的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养120h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：淀粉15g，大豆粉5g，蛋白胨15g，甘油15g，CaCO₃2g，粗海盐30g，余量为水，pH 7.4。经本方法制备的假诺卡氏菌SCSIO 01299的发酵培养物中PseudonocardianA和B的含量比较高。 

本发明通过实验发现，Pseudonocardian A和B对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 29213，苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringensis和粪肠球菌Enterococcus faecalis ATCC29212具有抗菌活力，MIC值在2～4μg/ml之间，由此可见化合物Pseudonocardian A和B具有较好抑菌活性，有望研发成为抗菌新药。