[发明专利]静注巨细胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种静注巨细胞病毒人免疫球蛋白，其特征在于：所述静注巨细胞病毒人免疫球蛋白比活性不小于2.5PEI-U/mg，抗-CMV效价不小于100PEI-U/ml，纯度大于98.2％，蛋白含量为51～55mg/ml。

2.一种静注巨细胞病毒人免疫球蛋白的方法，包括以下步骤：

(1)FI+II+III、FII+III沉淀制备

取经酶联免疫法测定的抗-CMV高效价的人血浆，2～30℃下融浆，合并混合；

①FI+II+III沉淀制备

用生理盐水调节血浆蛋白含量至45～55mg/ml，用冰乙酸调节pH至6.0～6.5，加入95％乙醇或无水乙醇调节乙醇浓度至20～25％，反应温度为-5.5～-4.5℃，搅拌反应为4～6小时，反应完毕离心或压滤分离获得FI+II+III沉淀；

②FII+III沉淀制备

用生理盐水调节血浆蛋白含量至45～55mg/ml，用冰乙酸调节pH至6.8～7.2，加入体积比分数为95％的乙醇或无水乙醇并调节乙醇浓度至7.5～8.5％，反应温度为-2.5～-2.0℃，搅拌反应4小时，反应完毕经离心或压滤分离去除FI沉淀，获得上清液，用冰乙酸调节上清液pH至6.0～6.5，加入95％乙醇或无水乙醇调节乙醇浓度至20～25％，反应温度为-5.5～-4.5℃，搅拌反应为4～6小时，反应完毕经离心或压滤分离获得FII+III沉淀；

(2)FI+II+III或FII+III沉淀溶解

FI+II+III或FII+III沉淀用0.9～1.1倍血浆量的pH为4.8～5.2、浓度为20～80mM乙酸钠缓冲液在2～8℃下搅拌8～16小时，使沉淀充分溶解，经离心或压滤分离上清液；

(3)辛酸沉淀

用4mol/L乙酸或0.5～1mol/L氢氧化钠调节上清液pH至4.5～5.5，按10～100mmol/L浓度加入辛酸，在18～25℃下搅拌反应1～3小时，经离心或过滤分离上清液；

(4)辛酸病毒灭活

上清液用孔径为1.0μm滤膜过滤，控制过滤压力不大于0.25MPa，用4mol/L乙酸或0.5～1mol/L氢氧化钠调节滤液pH至4.5～5.5，补加注射用水或辛酸调节悬液辛酸浓度至20～80mmol/L，在20～30℃下搅拌1～2小时，离心或过滤分离上清液；

(5)乙醇沉淀

用0.5～1mol/L盐酸或氢氧化钠调节上清液pH至4.5～5.5，按12～16％浓度加入95％乙醇或无水乙醇进行沉淀反应，在-4.0～-2.5℃下搅拌反应2～8小时，离心或压滤分离上清液；

(6)超滤

上清液经0.45μm滤膜过滤，控制过滤压力不大于0.25MPa，滤液用30KD超滤膜15～20倍浓缩，经8～10倍体积pH 6.0～7.1的20～60mmol/L的磷酸盐缓冲液超滤透析，超滤后收样控制蛋白含量为25～40mg/ml；

(7)阴离子交换层析

用pH为6.0～7.1、浓度为20～60mmol/L的磷酸盐缓冲液作为平衡缓冲液平衡层析柱8～10柱体积，按每毫升填料不大于填料最大载量的70～80％计算上样蛋白量，上样后收集穿透液，挂柱杂蛋白经含2mol/LNaCl的pH 6.0～7.1的20～60mmol/L的磷酸盐缓冲液洗脱；

(8)纳米膜除病毒过滤

用0.5～1mol/L的盐酸调节穿透液pH至4.2～5.0，经0.1μm滤膜预过滤后，用Novasip DV20纳米膜过滤除病毒，控制过滤压力不大于0.25Mpa；

(9)超滤

除病毒后滤液经30KD超滤膜浓缩蛋白含量至80～100mg/ml，用8～10倍注射用水超滤，超滤后收样控制蛋白含量为80～150mg/ml；

(10)配制

测定超滤后原液蛋白含量，用注射用水稀释调整制品蛋白含量至51～55mg/ml，同时按9～11％的量加入麦芽糖，用0.5～1mol/L盐酸调节pH至3.8～4.2。

3.根据权利要求2所述的静注巨细胞病毒人免疫球蛋白的方法，其特征在于：在所述配制步骤后除菌分装，经0.2μm滤膜过滤除菌，控制过滤压力不大于0.25MPa，按蛋白含量51～55mg/ml，效价不小于100PEI-U/ml规格分装。