[发明专利]制备细胞毒性淋巴细胞的方法

权利要求书

1.一种制备细胞毒性淋巴细胞的方法，所述方法的特征在于所述方法包括在重组纤连蛋白片段或其混合物存在下，进行细胞毒性淋巴细胞的诱导、维持、扩增至少之一的步骤，其中，所述重组纤连蛋白片段具有细胞黏附活性和/或肝素结合活性，且所述重组纤连蛋白片段为包含序列表中SEQ ID NO：1-9，11和13-19所示的氨基酸序列至少其中之一的多肽。

2.权利要求1的方法，其中与不存在纤连蛋白、其片段或其混合物下通过制备细胞毒性淋巴细胞的方法而获得的细胞毒性淋巴细胞相比，所述细胞毒性淋巴细胞高度表达白细胞介素-2受体。

3.权利要求1的方法，其中与不存在纤连蛋白、其片段或其混合物下通过制备细胞毒性淋巴细胞的方法而获得的细胞毒性淋巴细胞相比，所述细胞毒性淋巴细胞含有更高比率的CD8阳性细胞。

4.权利要求1-3之任一项的方法，其中与不存在纤连蛋白、其片段或其混合物下通过制备细胞毒性淋巴细胞的方法而获得的细胞毒性淋巴细胞相比，所述细胞毒性淋巴细胞高度保持细胞毒性活性。

5.权利要求1的方法，其中与不存在纤连蛋白、其片段或其混合物下制备细胞毒性淋巴细胞的方法相比，细胞毒性淋巴细胞的扩增倍数高。

6.权利要求1-5之任一项的方法，其中所述重组纤连蛋白片段或其混合物固定在固相上。

7.权利要求6的方法，其中所述固相为细胞培养设备或细胞培养载体。

8.权利要求7的方法，其中所述细胞培养设备为培养皿、培养瓶或培养袋，所述细胞培养载体为珠粒、薄膜或载玻片。

9.权利要求1-5之任一项的方法，其中细胞毒性淋巴细胞的诱导、维持、扩增至少之一在含有重组纤连蛋白片段或其混合物的培养基中进行。

10.权利要求1的方法，所述方法包括在包含培养基的细胞培养设备中，在重组纤连蛋白片段或其混合物存在下，进行细胞毒性淋巴细胞的诱导、维持和扩增至少之一，其中所述方法满足以下条件之任一项：

(a)培养初始时细胞数量与细胞培养设备的培养面积的比率为1细胞/cm²-5×10⁵细胞/cm²；

(b)培养初始时培养基中的细胞浓度为1细胞/ml-5×10⁵细胞/ml。

11.权利要求10的方法，其中所述方法没有稀释步骤或调换细胞培养设备的步骤。

12.通过权利要求1-11之任一项的方法获得的细胞毒性淋巴细胞。

13.一种药物，其包含作为有效成分的通过权利要求1-11之任一项的方法获得的细胞毒性淋巴细胞。

14.权利要求1-11之任一项的方法，所述方法进一步包括将外源基因转导入细胞毒性淋巴细胞的步骤。

15.权利要求14的方法，其中外源基因用逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒或猿猴病毒转导。