[发明专利]乙肝病毒表面抗原的免疫显性HLA-A*1101限制性CTL表位及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医药生物领域，涉及一种抗原表位，特别涉及乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的免疫显性HLA-A*1101限制性CTL(细胞毒性T淋巴细胞)表位。

背景技术

乙型肝炎(Hepatitis B)是由于感染了乙型肝炎病毒B(Hepatitis B virus, HBV)引起的一种严重危害人类健康的传染病。目前全球约有4亿HBV携带者，主要集中在发展中国家。在全球范围内，中国属高流行区，HBV携带者约占总人口的10%(1.2亿)，慢性肝炎患者约3000万。乙型肝炎多为围产期传播、青春期发病、青壮年恶化，因此其危害人群多为青壮年。大部分患者感染后通过自然病程痊愈，而部分患者迁延不愈并发展为肝硬化、肝癌。据估计，全球每年至少有50万慢性感染患者死于肝硬化和肝癌。乙型肝炎已成为我国最严重的公共健康问题之一。随着对体液保护性免疫的深入认识和预防性疫苗的使用，乙型肝炎的特异性预防问题基本得到解决，但乙型肝炎的特异性治疗至今一直未能突破。

目前已证实：(1)HBV作为一种嗜肝病毒，并不能直接引起肝细胞损伤，其感染的病理和临床后果取决于免疫机制；(2)作为细胞内感染，慢性持续性感染状态主要与机体抗感染细胞的免疫应答缺陷有关。其中，HBV特异性CTL反应决定了HBV感染的最终结果。感染HBV后，CTL活性高者体内病毒被清除而痊愈；CTL活性低或根本检测不到的感染者则发展为慢性持续感染状态，并进一步发展为肝硬化或/和肝癌。因此，在体启动HBV特异性CTL反应有望解决HBV慢性感染持续状态及其相关疾病的防治问题，对研制乙型肝炎和乙肝继发性肝硬化、肝癌的治疗性疫苗具有非常重要的意义。

既往研究发现，引起CTL免疫应答反应的并非完整的病毒抗原分子，而是抗原来源的特异性CTL表位。抗原提呈细胞将抗原加工处理成多肽片段，该多肽片段即为CTL表位，其与主要组织相容性复合体(MHC) I类分子结合形成多肽-MHC复合物(pMHC)，并最终将pMHC呈递到细胞表面供CD8⁺ T细胞表面的T细胞抗原受体(TCR)识别，从而活化CTL，引发CTL免疫应答反应。因此，在HBV相关抗原中鉴定出免疫显性CTL表位是慢性乙型肝炎免疫治疗的前提和基础。

CTL表位具有MHC I类分子限制性。既往研究发现的HBV相关抗原的免疫显性CTL表位多是HLA-A*0201限制性表位。例如，目前已经鉴定出HBcAg_18-27为HBcAg的HLA-A*0201限制性CTL表位，且该表位已应用于乙型肝炎治疗用多肽疫苗εPA44的设计研发中。εPA44摒弃了HBcAg中抑制免疫反应的不利因素并联合了有利于激发细胞免疫的化学基团，体内外实验证实，εPA44能够有效打破乙肝免疫耐受，重建针对HBcAg18-27的特异性CTL免疫功能，有效抑制和清除乙肝病毒。目前，εPA44已经顺利进入临床IIb期试验，但其局限性在于适用人群只能是HLA-A*0201个体。在我国，携带HLA-A*1101等位基因的人群占到了总人群的近三分之一，是仅次于HLA-A*0201的高频等位基因。但目前关于HBV来源的HLA-A*1101限制性CTL表位的研究目前很少。文献报道了一个HLA-A*1101限制性CTL表位HBcAg_88-96，是用弱酸及去污剂处理，抽提细胞膜上与HLA-A*1101分子结合的抗原肽，经HPLC分离、纯化及序列分析获得的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种HBsAg的免疫显性HLA-A*1101限制性CTL表位，目的之二在于提供该CTL表位在制药方面的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1．HBsAg的免疫显性HLA-A*1101限制性CTL表位，由以下氨基酸序列组成：Ser-Met- Tyr-Pro-Ser-Cys-Cys-Cys-Thr-Lys(SEQ ID No.1)，即HBsAg_295-304。

2．所述HBsAg的免疫显性HLA-A*1101限制性CTL表位在制备乙型肝炎治疗性多肽疫苗中的应用。