[发明专利]一种汉族人肾肉瘤样癌细胞系及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属微生物动物细胞系领域，具体涉及一种汉族人肾肉瘤样癌细胞系RCC09HYF，及其制备方法。

背景技术

肿瘤细胞系在肿瘤的基础研究中具有重要的地位，采用细胞系进行体外实验及体内动物模型的构建，对于在后基因组时代即功能基因组时代，挖掘重要基因的潜在功能至关重要。由于细胞系具有比较恒定的遗传背景，因此细胞系仍是目前完成基因功能的体外检测和验证的重要工具。人癌细胞的体外培养，不仅能从分子、基因水平深入研究肿瘤发生和发展机理，而且对临床的早期诊断、药物筛选和肿瘤治疗具有重要意义，如sunitinib malate治疗转移性肾透明细胞癌目前进入了III期临床实验，之前该药物在786-O等肾癌细胞系的作用机制的深入研究起到了奠基作用。

肾肉瘤样癌是肾脏恶性肿瘤的特殊类型，仅占肾实质肿瘤的1.0％-8.0％，临床少见，瘤体具有浸润性生长的生物学特性，恶性程度高，病程进展迅速，转移通常发生早，多数患者对放化疗不敏感，预后极差。T1患者的平均生存期为49.7个月，T2-T4患者的平均生存期为6.8个月。1968年Farrow等首先发现并命名为肉瘤样癌(Farrow GM，Harrison EG，UTZ DG.Sarcomas and sarcomatoid and mixed malignant tumors of the kidney in adults-Part III.Cancer 1968，22：556-563)。该肿瘤成分中，上皮部分可以是各种病理类型的肾细胞癌，70％为透明细胞癌或颗粒细胞癌；肉瘤样部分可以表现为血管外皮肉瘤样、横纹肌肉瘤样、骨肉瘤样、软骨肉瘤样及未分化肉瘤样等结构。目前肾肉瘤样癌的诊断水平和治疗效果没有突破性进展，早期发现并进行根治性手术治疗仍然是首选的诊断治疗方案。临床上证实少部分肾肉瘤样癌病例对细胞因子治疗有一定效果，但属于个案报道，尚未得到临床实验的证据。由于肾肉瘤样癌中，肉瘤样结构与上皮结构的混合比例直接影响了患者预后及系统治疗，肉瘤样结构占的比例越高，患者预后越差，系统治疗越困难。为了阐明肾肉瘤样癌的遗传特性，特别是肉瘤样结构与上皮结构部分的相互作用在肾细胞癌恶性进展中发生的作用，从而指导临床的系统治疗，建立体外肾肉瘤样癌细胞模型是必经之路也是当务之急。

目前，ATCC尚未收录任何有关肾肉瘤样癌的细胞系，鉴于全世界人种的遗传背景和生活条件的差异，肿瘤发病率和病死率也有所不同，对汉族人新鲜肾肉瘤样癌细胞的培养及细胞系的建立是研究中国人肾癌转移机制的重要步骤，具有切实的科学意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种汉族人肾肉瘤样癌细胞系。

本发明应用体外细胞培养技术建立人肾肉瘤样癌细胞系，采用细胞株作为实验对象，分析肿瘤细胞的生长、转移等生物学行为特点，为进一步研究汉族人肾细胞癌发生和转移机制，为临床预测、诊断及治疗提供有效且稳定的细胞模型。

本发明提供一种汉族人肾肉瘤样癌细胞系RCC09HYF，其保藏号为CCTCC C201130，于2011年5月11日保藏于中国典型培养物保藏中心。

本发明还提供了上述汉族人肾肉瘤样癌细胞系RCC09HYF的制备方法，包括以下步骤：

本发明的RCC09HYF细胞取自一位汉族肾肉瘤样癌患者的肾原位肿瘤组织。将切除的肿瘤组织放入盛有少量无血清DMEM培养基(含1000单位/ml青霉素，3μg/ml两性霉素B)的细胞培养平皿中，剔除坏死组织、脂肪结缔组织、血管等，随后将可肉眼分辨的肿瘤组织块于4℃下浸泡于无血清的DMEM培养基中。30min后，将组织块用眼科剪剪成1-3mm³的小块，将组织块随同浸泡液转移至离心管中，反复摇晃清洗2-3min，1500转/分，离心10min。弃上清，重新加入DMEM培养基悬浮组织块，反复摇晃清洗2-3min，1500转/分，离心10min，弃上清。用1ml的DMEM完全培养基(DMEM培养基，10％胎牛血清，青霉素100单位/ml，链霉素100μg/ml)重悬组织块，并接种到玻璃细胞培养瓶(100ml)中。将培养瓶置于37℃，5％CO₂，95％湿度的CO₂培养箱中培养24h。24h组织块贴壁后补充加入DMEM完全培养基2-2.5ml继续培养。

本发明的汉族人肾肉瘤样癌细胞系RCC09HYF的具体制备方法如下：

1.原代培养：