[发明专利]禽流感灭活疫苗的制备方法及其产品

说明书

技术领域

本发明涉及一种灭活疫苗的制备方法，尤其涉及一种禽流感灭活疫苗的制备方法以及由该方法制备得到的灭活疫苗产品，本发明属于禽流感灭活疫苗的生产领域。

背景技术

禽流感是禽流行性感冒的简称，它是一种由甲型流感病毒的一种亚型(也称禽流感病毒)引起禽发生急性出血性的传染性疾病，以引发呼吸道发病或隐性感染为特点。世界动物卫生组织(OIE)、国际贸易组织和国际兽医局将高致病性禽流感HPAI定为A类传染病，又称“真性鸡瘟”或“欧洲鸡瘟”。

禽流感病毒感染后可以表现为轻度的呼吸道症状和消化道症状，死亡率较低。也可表现为较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。这种症状上的不同，主要是由禽流感病毒的毒型决定的。

疫苗是防治禽流感最有效的手段，可按程序免疫接种禽流感灭活疫苗。禽流感灭活疫苗疫苗具有制备工艺简单，免疫效果确实，免疫持续时间较长等特点，已被许多国家地区在家禽中使用，并在预防和控制禽流感暴发中起到一定积极作用。

目前，在禽流感疫苗生产中，通常采用甲醛作为灭活剂进行病毒的灭活。甲醛是一种有强烈刺激性的致癌物质。甲醛既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基(如A，G，U)，又可作用于病毒壳蛋白。作用于病毒壳蛋白时，易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集，不能再作用于壳蛋白内的核酸。这样，病原体蛋白的抗原性会遭到严重破坏，并可能有病原体存活。故而，为了使病原得到充分的灭活，以免发生散毒事故发生，疫苗生产过程中，均采用加大甲醛浓度及延长灭活时间等措施。这样的结果就可能造成，疫苗产品中残留大量游离甲醛，若随疫苗注入机体后，会产生制激性反应。且在疫苗的保存过程中，多余的游离甲醛醛基不断作用于病毒的抗原，使抗原在醛基的作用下逐渐降解，这样疫苗中的有效成分不断流逝，不仅缩短了疫苗的保存期，还导致该疫苗免疫动物后存在抗体水平下降的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有的禽流感灭活疫苗含有较高浓度的甲醛残留导致灭活疫苗存在安全性差、保存期短和保护效力差等缺陷，提供一种新的禽流感灭活疫苗的制备方法，该制备方法能够有效的去除禽流感灭活疫苗中的甲醛残留，所制备的禽流感灭活疫苗具有免疫副反应小、保存期长、抗体水平高等优点。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种禽流感灭活疫苗的制备方法，包括：制备禽流感病毒液；禽流感病毒液中加入甲醛，灭活病毒液；向灭活病毒液中加入佐剂，乳化，即得；其中，在向灭活病毒液中加入佐剂之前对灭活病毒液进行下述处理：将灭活后的病毒液浓缩，将浓缩后的病毒液稀释后再加入佐剂，乳化。

为了达到更好的技术效果，本发明优选采用膜分离为基础的切向流过滤方法(Tangential Flow Filtration，TFF)来进行病毒的浓缩操作。TFF(Tangential Flow Filtration)切向流过滤，也经常被称作交叉流过滤(Cross-flow Filtrarion)，是指液体在泵的驱动下沿着与膜表面相切的方向流动，在膜上形成压力，使部分液体透过膜，而另一部分液体切向地流过膜表面，将被膜截留的颗粒和大分子冲走，避免它们堆积在膜表面，造成膜堵塞和流速下降。优选的，将灭活病毒液用切向流过滤方法浓缩2次；其中，将第1次浓缩后得到的病毒浓缩液中加入相同体积的灭菌注射用水，充分混合，进行第2次浓缩；当滤除液为原始液的1/2体积时停止第2次浓缩，向第2次浓缩后的病毒液中加入相同体积的灭菌注射用水，充分混合；再加入佐剂，乳化，即得。

其中，所述的切向流过滤优选在以下参数下进行：进口压力控制为1.0bar，循环口压力控制为0.4bar，压力差控制在0.6bar以上；料液温度控制在40-45℃以下的条件进行浓缩

本发明通过试验发现，在将灭活病毒液采用滤膜进行过滤浓缩之前，将灭活病毒液进行离心处理以去除杂蛋白，这对于提高疫苗的安全性和抗体水平有非常重要的作用；其中，所述的离心转速优选为8000-16000rpm，更优选为12000rpm；所述离心的次数可以为1-3次，优选为2次。此外，将经过离心后的病毒液再用0.45μm的滤膜进行过滤预处理也能有效的去除病毒液中的各种杂质。