[发明专利]前列腺癌靶向基因的寡核苷酸适配体、递释载体、递释系统及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种前列腺癌靶向基因前列腺癌靶向基因的寡核苷酸适配体、递释载体、递释系统及其制备方法。

背景技术

前列腺癌(prostatic cancer，PCa)是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤，其发病率随年龄的增长而提高，已成为严重威胁人类健康的恶性疾病。在2010年美国癌症学会公布的统计报告中，前列腺癌在男性的发病率中排名第一，死亡率排名第二，仅次于肺癌。对于PCa的治疗，早期完整手术切除前列腺是首选的治疗方案，但是手术治疗会伴有严重的并发症及医源性损伤，而且对已发生转移的PCa无效。目前临床上治疗中晚期PCa主要采用放疗、化疗(包括内分泌治疗)等手段，这些治疗方法存在用药顺应性差、组织选择性差、毒性反应大及耐药性等问题。基因治疗相对于上述方法来说具有许多无可比拟的优点，如靶向性好、毒副作用小及可特异性地杀伤肿瘤细胞等，但是外源基因自己不能主动进入细胞，因此基因治疗应用于临床还需要一种安全、高效的传递载体进行递送。

目前报道较多的基因载体主要包括病毒载体和非病毒载体，病毒载体虽然具有很高的转染率，但病毒载体的制备复杂且昂贵，需要重整病毒，更重要的是人们对于其可能引起免疫反应和基因突变引起致癌性转化的安全隐患。而非病毒载体设计灵活，制备方便，价格低廉，无毒，无免疫反应，可以实现细胞特异性和长期基因表达的优点。常见的非病毒载体主要有聚乙烯亚胺(PEI)，聚精氨酸(PLR)，聚酰胺-胺(PAMAM)树枝状高分子等聚阳离子高分子材料，其中聚乙烯亚胺，聚精氨酸毒性较大，但通过特定的亲水性聚合物修饰，可以降低其毒性。而PAMAM的粒径大小、电泳性质和其他一些拟生态性质与球状蛋白质非常相似，被称为“人工蛋白”。

但是上述阳离子聚合物载体还存在一个严重缺陷-靶向性差。目前用于解决前列腺癌靶向性差的方法，主要是通过在载体上连接可以特异识别前列腺癌组织的靶向头基，来完成对癌细胞的主动靶向作用。然而，目前主要使用的靶向头基是单克隆抗体，单克隆抗体存在合成困难、造价高昂、稳定性差等缺陷，成为制约其作为进一步向临床大规模生产发展的瓶颈。因此，有必要研发一种新型的前列腺癌靶向头基来替代单克隆抗体，以及开发一种新型的适用于前列腺癌的靶向治疗的前列腺癌靶向基因递释载体和相应的前列腺癌靶向基因递释系统。

发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是提供一种前列腺癌靶向基因的寡核苷酸适配体，这种寡核苷酸适配体制备方便、稳定性高。

本发明需要解决的另一技术问题是提供一种前列腺癌靶向基因递释载体，该基因递释系统将上述寡核苷酸适配体作为靶向头基，除了制备方便、稳定性高，而且能显著提高基因递释系统的前列腺癌靶向性和基因在前列腺癌组织的表达。

本发明需要解决的另一技术问题是提供一种前列腺癌靶向基因递释系统，其能显著提高治疗基因在前列腺癌组织的转染效率和表达水平

此外，本发明需要解决的另一技术问题是提供一种前列腺癌靶向基因递释载体和系统的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种前列腺癌靶向基因的寡核苷酸适配体，该寡核苷酸适配体的序列组成为：5′-GGGAGGACGAUGCGGAUCAGCCAUGUUUACGUCACUCCU-(CH₂)₆-S-S-(CH₂)₆-OH-3′，且具有2′-氟修饰。

本发明通过对第一代适体A10进行修饰，将原有适体A10的79个核苷酸长度裁剪到具有39个核苷酸长度的新型第二代适体A10-3.2，降低了合成难度，通过与前列腺癌表面特异性膜抗原结合作用发现，结合效率有所提高，并且对A10-3.2的每个核苷酸进行了2’-氟修饰，增加了稳定性。因此，证明A10-3.2寡核苷酸适配体是一种有效的前列腺癌靶向头基。

在本发明的另一个方面，提供了一种前列腺癌靶向基因递释载体，其由聚阳离子高分子材料、亲水性聚合物和A10-3.2寡核苷酸适配体为基础，三者以共价方式链接构成，其中，亲水性聚合物与聚阳离子高分子的摩尔比是1～25∶1，A10-3.2寡核苷酸适配体与聚阳离子高分子材料的摩尔比为1～5∶1；所述A10-3.2寡核苷酸适配体的序列组成为：5′-GGGAGGACGAUGCGGAUCAGCCAUGUUUACGUCACUCCU-(CH2)6-S-S-(CH2)6-OH-3′，且具有2′-氟修饰。