[发明专利]一种微生物酶法转化白藜芦醇苷为白藜芦醇的方法

权利要求书

1.一种用于发酵生产虎杖糖苷水解酶并高效转化虎杖苷为白藜芦醇的微生物菌株，该菌株经分子生物学和形态学鉴定为棘孢曲霉（Aspergillus.aculeatus），该菌株2010年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号，CGMCC No.3876。

2.权利要求1所述的微生物菌株发酵制备的复合酶，其特征在于：

⑴ 复合酶为胞外酶，含纤维素内切酶、纤维素外切酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶；

⑵ 复合酶发酵制备方法为，用培养基（配方3%～6%麸皮、0.5～1.0%蛋白胨、起始pH 5～6），无菌条件下接种棘孢曲霉CGMCC No.3876，在28～30℃条件下好氧发酵3～3.5天，发酵经过滤、5000～10000 r/min离心，上清液用截留分子量为5000 Da中空纤维膜浓缩5倍，浓缩液为胞外酶粗酶液。

3.权利要求1-2所述的微生物菌株及其发酵制备的复合酶，用于从富含白藜芦醇苷的植物材料中提取白藜芦醇苷及其类似物的方法和用途，其特征在于：

⑴ 富含白藜芦醇苷的植物材料可以是虎杖、花生壳、葡萄皮；

⑵ 提取白藜芦醇苷及其类似物的方法和用途为：用权利要求1-2所述的菌株复合酶与60～80目的虎杖干粉调浆，胞外酶粗酶液:虎杖干粉=1.5 mL:1 g；在35～40℃条件下酶法水解3～4小时；再用5～6倍体积95%工业酒精浸提3次，每次1.5～2小时，合并浸提液；结合常规方法挥干浸提液，获得白藜芦醇及其类似物的粗品。

4.权利要求1-2的菌株复合酶方法和用途还可以是用于转化白藜芦醇苷（虎杖苷）为白藜芦醇的工艺：用菌株棘孢曲霉CGMCC No.3876复合酶，在pH 5.0，55℃条件下水解催化用蒸馏水配制1%～5%虎杖糖苷粗品悬浊液，将虎杖苷转化为白藜芦醇的方法。

5.权利要求1-2所述的微生物菌株及其发酵制备的复合酶中，从中分离纯化获得虎杖糖苷水解酶及其用途，其特征在于：

⑴ 菌株棘孢曲霉CGMCC No.3876虎杖糖苷水解酶，由一个亚基组成，亚基分子量为27.3 kDa，等电点pI 4.65，最适反温度40℃，最适反应pH 5.0，Km=5 mg/mL虎杖苷, 虎杖糖苷水解酶比活力达1783.6 IU/(mg protein)

⑵ 用含量0.5%～1%，纯度为98%以上菌株棘孢曲霉CGMCC No.3876虎杖糖苷水解酶，在pH 5.0，55℃条件下水解催化用蒸馏水配制1%～5% 过饱和的虎杖糖苷悬浊液（虎杖糖苷原料含量98%以上），水解虎杖糖苷，并不断搅拌，水解3～6 h，获得过饱和的白藜芦醇过饱和悬浊液；虎杖糖苷在水溶液中溶解度很低，在过饱和状态下，虎杖糖苷被所述虎杖糖苷水解酶源源不断水解为白藜芦醇；由于白藜芦醇溶解度比虎杖糖苷溶解度更低，过饱和的白藜芦醇悬浊液不断有白藜芦醇析出，在此机制下，虎杖糖苷几乎完全水解为白藜芦醇的方法。