[发明专利]一种检测H5亚型禽流感病毒的测量审核用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种H5亚型禽流感病毒的测量审核用试剂盒。 

背景技术

H5亚型禽流感病毒为OIE规定的需申报的禽流感病毒，各国在进出口动物检疫和国内疫情普查过程中非常重视。在各国的家禽及其产品的进出口贸易活动中对H5亚型禽流感有严格的监管措施，在进出口家禽、野鸟中一旦检出，会造成恶劣的国际影响。 

另外，从2004年开始，日本、韩国、泰国、越南等亚洲国家和地区全面爆发H5亚型高致病性禽流感病毒。因此，立项进行H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR定性检测能力验证，确保监测体系的核心—技术能力问题得到认证保障，具有非常重要的现实意义。 

目前禽流感病毒荧光RT-PCR快速检测技术已在国家质检总局系统、农业部属的各地动物防疫站、全国所有禽肉出口集团公司的养殖场、禽肉加工场、各地的疾病预防控制中心，包括澳门民政总署化验所等多个行业部门的实验室推广应用，取得明显的经济和社会效益。在美国、加拿大等国家也都纷纷采用了荧光RT-PCR方法检测禽流感。 

对于H5亚型禽流感病毒核酸检测，主要为普通RT-PCR、实时荧光RT-PCR和NASBA，这些方法灵敏、快速、准确，已经在实际的检测工作中发挥了重要作用；另一方面，由于这些方法均为应对当前疫情而紧急开发出来，不同部门依据的方法不同，所用试剂也不尽相同，这样很可能出现针对同样的样品出现不同的结果。目前我国已经发布的标准有GB/T 19438.2-2004《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》和 GB/T19439-2004《 H5亚型禽流感病毒NASBA检测方法》。OIE 推荐使用的检测方法为普通RT-PCR、实时荧光RT-PCR和NASBA。 

H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR快速检测的实验能力是衡量家禽传染病诊断实验室检测高致病性禽流感病毒结果准确性的重要标志。因此，建立检测H5亚型禽流感病毒的测量审核用试剂盒能够考察实验室对H5亚型禽流感病毒的检测能力。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测H5亚型禽流感病毒的测量审核用试剂盒。该试剂盒主要在动物检疫专业的测量审核领域使用，用于比对实验室检测H5亚型禽流感病毒能力的试剂盒，即该试剂盒能用于评价考核实验室是否能正确检测H5亚型禽流感病毒。 

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 

一种检测H5亚型禽流感病毒的测量审核用试剂盒，保存于-20℃，该试剂盒是由以下样品组成：

A：含2×10¹⁰拷贝/mL目的核酸片段的溶液；

B：含10⁹拷贝/mL目的核酸片段的溶液；

C：含10⁸拷贝/mL目的核酸片段的溶液；

D：含10⁷拷贝/mL目的核酸片段的溶液；

E：含10⁶拷贝/mL目的核酸片段的溶液；

F：含10⁵拷贝/mL目的核酸片段的溶液；

G：不含目的核酸片段的溶液；

其中，所述目的核酸片段为H5亚型禽流感病毒体外转录的RNA片段，其对应的DNA序列为序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述溶液优选为70％乙醇溶液。

本发明所述测量审核用试剂盒的使用方法： 

1.各个参试实验室可选择国际、国家和行业标准方法或其他非标方法，进行H5亚型禽流感病毒核酸的检测验证；

2.试剂盒说明书

2.1 保存温度：-20℃；

2.2 有效期：12个月；

2.3 使用方法：使用前颠倒混匀管内液体，然后再提取RNA进行测试分析。

2.4 循环条件设置： 

第一阶段，反转录42 ℃ 30 min；

第二阶段，预变性92 ℃ 3 min；

第三阶段，92 ℃ 10 s；45 ℃ 30 s；72 ℃ 1 min；5个循环；

第四阶段，92 ℃ 10 s；60 ℃ 30 s；40个循环，在第四阶段每次循环的退火延伸时收集荧光。

试验检测结束后，根据收集的荧光曲线和Ct值判定结果。