[发明专利]一种从发酵液中纯化提取冠菌素的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中提取纯化冠菌素的方法，包括如下步骤：

1)取发酵液的上清液；

2)将步骤1)得到的上清液用大孔吸附树脂柱进行分离，得到粗提冠菌素；

3)将粗提冠菌素用硅胶柱进行分离，得到纯化的冠菌素；

所述发酵液为发酵菌制备冠菌素时产生的发酵液，所述发酵液为发酵容器内的所有物质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述分离方法包括如下步骤：将所述上清液流过大孔吸附树脂柱以进行吸附，再用洗脱缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；其中，所述上清液的速度为10升/小时-15升/小时；

所述步骤3)中，所述分离方法包括如下步骤：将所述粗提冠菌素流过硅胶柱以进行吸附，再用洗脱缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；其中，所述洗脱缓冲液的流速为0.5ml/min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述洗脱缓冲液的速度为8升/小时-12升/小时；

所述步骤3)中，所述粗提冠菌素的流速为0.5ml/min。

4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述洗脱缓冲液为如下中的至少一种：乙醇、丙酮、乙醚、石油醚、正己烷和乙酸乙酯；

所述步骤3)中，所述洗脱缓冲液为由乙酸乙酯∶甲醇∶水∶乙酸＝10∶2∶0.5∶0.5的体积比组成的混合物。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述洗脱缓冲液的体积用量为所述大孔吸附树脂柱体积的3-6倍；

所述步骤3)中，所述粗提冠菌素与硅胶的体积配比为1∶(30-50)。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述大孔吸附树脂为非极性的大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂的比表面积为500-920m².g^-1；

所述步骤3)中，所述硅胶的粒径为100-300目或100-200目或200-300目。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述大孔吸附树脂为HPD系列的大孔吸附树脂、YPRII型大孔吸附树脂或HZ系列的大孔吸附树脂；

所述步骤3)中，洗脱缓冲液的量3倍柱体积，收集第2个柱体积的洗脱液。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：在所述步骤2)前，包括将所述上清液的pH值调至2.5-5.5的步骤。

9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述取发酵液的上清液的方法包括如下步骤：将所述发酵液静置放置5-10分钟，以使菌体沉淀，再取上清液。

10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述硅胶柱的柱高30.5cm；柱外径3.2cm，内径2.6cm。