[发明专利]一种检测结核分枝杆菌方法及其专用引物

权利要求书

1.一种辅助检测或检测结核杆菌的引物对，所述引物对的一条引物的核苷酸序列为序列表中的序列1，所述引物对的另一条引物的核苷酸为序列表中的序列2。

2.一种辅助检测结核杆菌的引物组，由权利要求1所述的引物对和随机引物组成；

所述随机引物的核苷酸序列为5’-NNNNNN-3’，且自3’末端第1位和第2位核苷酸之间形成硫磷键，第2位和第3位核苷酸之间形成硫磷键。

3.一种辅助检测结核杆菌的PCR试剂，由A组试剂和B组试剂组成，

所述A组试剂由所述的引物对、dNTP、DNA聚合酶、Mg²⁺及PCR缓冲液1组成；

所述引物对中的各引物在所述A组试剂中的浓度均为0.5μM；

所述dNTP在所述A组试剂中的浓度为0.2mM；

所述DNA聚合酶在所述A组试剂中的终浓度1.25U/50μl；

所述B组试剂由所述随机引物、dNTP、BSA、phi29DNA聚合酶及PCR缓冲液2组成；

所述随机引物在所述B组试剂中的浓度为25μM；

所述dNTP在所述B组试剂中的浓度为0.5mM；

所述phi29DNA聚合酶在所述B组试剂中的终浓度5U/10μl；

所述BSA在所述B组试剂中的浓度为0.2μg/μl。

4.含有权利要求1所述引物对、权利要求2所述引物组或权利要求3所述的PCR试剂的试剂盒。

5.权利要求1所述引物对、权利要求2所述引物组或权利要求3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在辅助检测结核杆菌中的应用。

6.一种辅助检测待测样品中结核杆菌的方法，包括如下步骤：

1)用权利要求3所述的PCR试剂中的所述B组试剂对待测样品进行多重置换扩增，得到MDA产物；

2)用权利要求3所述的PCR试剂中的所述A组试剂对步骤1)得到的所述MDA产物进行再次PCR扩增，若得到PCR产物，则待测样品中疑似含有结核杆菌，若没有得到PCR产物，则待测样品中疑似不含有结核杆菌。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述多重置换扩增中，以待测样品的基因组DNA为模板；

步骤2)中，所述PCR扩增中，以步骤1)得到的所述MDA产物为模板。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：

所述PCR产物的核苷酸序列为序列表中的序列3。

9.根据权利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：

所述待测样品为痰液。