[发明专利]一种重组的HSV扩增子载体及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种重组的HSV扩增子载体的构建及其用途。

背景技术

单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus，HSV）是一种属于疱疹病毒科a病毒亚科的DNA病毒，分为HSV-1和HSV-2两个血清型。单纯疱疹病毒（HSV-1）的基因结构为152kb的双链线性DNA，形成分别为长片段UL和短片段US相连的2个片段。HSV基因组含有89个分别为立早期（IE），早期（E）和晚期（L）顺序表达的编码基因，3个与DNA复制有关的顺式作用元件（1个oriL和2个oriS），以及与病毒包装有关的包装信号（pac）序列。在疱疹病毒基因组的外面，依次包被有3层结构，分别为呈20面体结构的核衣壳（capsid），由蛋白构成的间层蛋白（tegument）以及含糖蛋白的外囊膜（李琦涵, 姜莉. 人类疱疹病毒的病原生物学，北京，化学工业出版社,2009.）。

人类是单纯疱疹病毒HSV-1和HSV-2传播的唯一宿主，据报道正常人群的感染率高达60%-95%，其传播途径主要通过皮肤粘膜的直接接触和体液接触，包括疱疹液，眼泪，鼻涕，唾液，精液和生殖道分泌物等。单纯疱疹病毒经皮肤和粘膜感染后，可经神经，血液或直接扩散的形式传播至人体不同的组织细胞并在人体内终生呈现显性感染-潜伏感染-再激活感染的周期发作。单纯疱疹病毒感染绝大多数为无症状的潜伏感染，但少数人呈现从皮肤粘膜疱疹，如面部口唇疱疹，到不同器官不同严重程度的疱疹性炎症，如鼻炎，鼻窦炎，角膜炎，视网膜炎，迷路炎，急性肝炎，盆腔炎，肺炎，前列腺炎，膀胱尿道炎和附睾精囊腺炎，以及致死率高达70%的疱疹性脑炎。生殖器疱疹是一种较常见的无彻底治愈方法的性传播疾病，不仅造成泌尿生殖器系统反复发作的炎症，而且可增加HIV的感染机率。除上述直接的感染性疾病外，疱疹病毒感染还可造成一些其它疾病或并发症的发生，例如，HSV-1和HSV-2均能感染血管内皮细胞和血管平滑肌细胞，造成血管内皮细胞和血管平滑肌细胞胆固醇代谢障碍和局部炎症，从而导致高血压，动脉粥样硬化和血栓形成等心脑血管疾病。此外，另有文献报道，HSV感染还与老年痴呆的发生有关（Letenneur L, Pérès K, Fleury H, et al. Seropositivity to herpes simplex virus antibodies and risk of Alzheimer's disease: a population-based cohort study. PLoS One. 2008, 3(11):e3637）。

基于上述HSV病毒的广泛的不同类型细胞的感染性，特别是很强的皮肤粘膜上皮细胞和神经细胞的嗜性以及不整合的安全性，HSV病毒被认为是构建转基因和基因治疗的最理想的载体之一。源于疱疹病毒HSV的载体有3种，分别为条件复制型载体，复制缺陷型载体和扩增子载体。所谓条件复制型HSV载体，就是经基因改造后，病毒选择性的在特定的细胞类型中进行复制，而很少在正常细胞中复制，该类载体主要用于溶肿瘤的治疗；复制缺陷型载体，是一种敲除病毒一个或多个HSV复制关键基因（譬如ICP4和ICP27等）的转基因载体，使其在转基因的细胞中失去再复制的能力以增加载体的安全性，而载体的制备只能在提供缺失基因的细胞系中进行；扩增子载体是复制缺陷的和辅助病毒依赖的载体，由于完全缺少病毒基因，不仅具有很大的携带外源基因的能力，而且对转基因细胞没有细胞毒性和遗传安全性的担忧，与野生的HSV-1病毒在结构，免疫学，宿主范围上相同，被认为是最理想的病毒源的转基因研究和基因治疗载体之一。