[发明专利]猪流感二价灭活疫苗的制备方法及其产品

权利要求书

1.一种猪流感二价灭活疫苗，其特征在于，所述的猪流感的二价灭活疫苗包括抗原和免疫佐剂：所述的抗原由二乙烯亚胺灭活的猪流感一个亚型病毒和另一亚型病毒以等抗原含量混合而成，所述的抗原为46体积份数；所述的免疫佐剂为206佐剂，所述免疫佐剂为54体积份数。

2.根据权利要求1所述的猪流感二价灭活疫苗，其特征在于，所述的猪流感抗原为猪流感H1N1亚型病毒和猪流感H3N2亚型病毒。

3.一种制备权利要求1或2所述猪流感二价灭活疫苗的方法，包括：

(1)将细胞系进行传代和培养；

(2)将猪流感H1N1亚型病毒和猪流感H3N2亚型病毒分别接种长满90-100％细胞的介质上，用维持液培养，制备生产种毒；

(3)将所制备的生产种毒分别接种长满90-100％细胞的介质上，用维持液培养增殖得到猪流感H1N1亚型病毒抗原液和猪流感H3N2亚型病毒抗原液；

(4)将猪流感H1N1亚型病毒抗原液和猪流感H3N2亚型病毒抗原液分别加入灭活剂灭活，加入中和剂中和，混合均匀，加入免疫佐剂，乳化，即得。

4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(1)、(2)或(3)中所述的传代细胞系：MDCK细胞系、MDBK细胞系、vero细胞系、BHK-21细胞系、CEF细胞系、PBS-1细胞系、Marc-145细胞系、PER-C6细胞系、MEK细胞系或FRhk-4细胞系。

5.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的细胞培养方法为以下任意一种：在转瓶中培养，使其细胞密度达到2×10⁵-6×10⁵/ml；在生物反应器中添加附着载体进行悬浮培养，使细胞密度达到2×10⁶-5×10⁶/ml。

6.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(2)或(3)中所述的接种量为0.15-2％细胞毒种或MOI为0.002～0.005细胞毒种。

7.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(2)或(3)中所述的细胞维持液的组成包括：含0.5-2μg/ml胰酶的无血清的MEM或DMEM。

8.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的灭活剂为二乙烯亚胺，其终浓度为0.002～0.003M；所述的中和剂为3.015M的硫代硫酸钠，其终浓度为0.02M。

9.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(4)中两种抗原液以等抗原含量，每剂量疫苗中两种抗原含量为960HAU；步骤(4)中将抗原与佐剂按照46∶54的体积比例进行混合乳化。

10.一种制备权利要求1所述猪流感二价灭活疫苗的方法，包括：

(1)将猪流感H1N1亚型和H3N2亚型病毒分别接种鸡胚，制备生产种毒；其中，所述猪流感H1N1亚型是猪流感H1N1 LN株，其微生物保藏号是：CGMCCNo.4141；所述H3N2亚型病毒是猪流感H3N2 HLJ株，其微生物保藏号是：CGMCCNo.4142；

(2)将所制备的生产种毒分别接种鸡胚，得到猪流感H1N1亚型病毒抗原液和猪流感H3N2病毒抗原液；

(3)将猪流感H1N1亚型病毒抗原液和猪流感H3N2亚型病毒抗原液分别加入灭活剂灭活，加入中和剂中和，混合均匀，加入免疫佐剂，乳化，即得。

11.按照权利要求10所述的方法，其特征在于：步骤(1)或(2)中所述的鸡胚选自9-11日龄的SPF鸡胚或非免鸡胚；步骤(1)或(2)中所述的接种量为0.2％～0.5％鸡胚毒种。

12.按照权利要求10所述的方法，其特征在于：步骤(3)中两种抗原液以等抗原含量，每剂量疫苗中两种抗原含量为480-960HAU；步骤(3)中将抗原与佐剂按照46∶54的体积比例进行混合乳化。

13.权利要求1或2所述的猪流感二价灭活疫苗在制备预防猪流感H1N1或H3N2亚型病毒的药物中的用途。