[发明专利]1-甲氧基钩吻碱的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种1-甲氧基钩吻碱(gelsevirine)的制备方法，特别是涉及一种从钩吻提取物中分离制备1-甲氧基钩吻碱的方法。

背景技术

钩吻(Gelsemium elegans Benth.)为马钱科胡蔓藤属植物，分中国钩吻和北美钩吻两种。我国盛产于福建、浙江、广西、广东、湖南等地，又名断肠草。其药用部位为全草。具有祛风攻毒，消肿止痛的功效。

钩吻碱类化合物是存在于钩吻中的一类化合物，被证明在肿瘤、镇痛等方面有较好的活性。临床上用于抑制肿瘤细胞生长、治疗神经痛、局部用于扩瞳等作用，可以被认为是钩吻药效的物质基础之一。

1-甲氧基钩吻碱(gelsevirine式1)是自钩吻中分离得到的一种钩吻碱类化合物，其含量较高，具有一定的开发新药的潜力。其药理作用主要包括：其能抑制肿瘤细胞生长，镇痛、镇静等作用。目前，未见到1-甲氧基钩吻碱的制备工艺的相关报道，因此，1-甲氧基钩吻碱分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。

式1

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从钩吻提取物中制备1-甲氧基钩吻碱的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明的从钩吻提取物中制备1-甲氧基钩吻碱的方法，包括步骤：

(1)乙酸乙酯萃取步骤

将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5∶1～2∶1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A；

(2)硅胶色谱纯化步骤

将步骤(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以体积比为50∶1～25∶1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有1-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿洗脱5BV后，用氯仿-甲醇100∶1洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有1-甲氧基钩吻碱的流份，回收溶剂，即得浸膏C。

(3)Sephadex LH-20色谱纯化步骤

将步骤(2)所得的浸膏C Sephadex LH-20柱色谱分离，甲醇洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有1-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的1-甲氧基钩吻碱。

其中，所述硅胶色谱纯化步骤与Sephadex LH-20色谱纯化步骤的顺序能够颠倒。

所述步骤(1)中钩吻提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为70％～95％的乙醇溶液。

采用本发明的方法依次经(1)乙酸乙酯萃取，(2)硅胶色谱纯化，(3)SephadexLH-20色谱纯化，能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备1-甲氧基钩吻碱的简化工艺，可用于1-甲氧基钩吻碱的工业制备。

附图说明

图1为1-甲氧基钩吻碱的¹H-NMR图。

图2为1-甲氧基钩吻碱的¹³C-NMR图。

图3为1-甲氧基钩吻碱的DEPT图。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1 1-甲氧基钩吻碱的制备

钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为70％乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。

将提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约40g。

将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1∶30，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以氯仿洗脱5BV后，换用体积比为50∶1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF₂₅₄)点样，以体积比为20∶1的氯仿-甲醇溶液展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有1-甲氧基钩吻碱的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约12g。将浸膏B再用薄层硅胶柱色谱分离(浸膏样品与硅胶重量比为1∶100，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以体积比为100∶1的氯仿-甲醇溶液洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF₂₅₄)点样，以体积比为50∶1的氯仿-甲醇溶液展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有1-甲氧基钩吻碱的部分，减压回收溶剂，即得浸膏C约1g。