[发明专利]用脂肪酶水解酯键

说明书

本申请是申请日为2005年10月05日，申请号为200580034405.6(国际申请号为PCT/DK2005/000639)，名称为“用脂肪酶水解酯键”的发明专利申请的分案申请。

发明所属领域

本发明涉及用脂肪酶处理而水解底物中的酯键的方法。还涉及用于所述方法的脂肪酶和编码所述脂肪酶的多核苷酸。

发明背景

菌株热硫化氢热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus)DSM 7021、布氏嗜热厌氧杆菌布氏亚种(Thermoanaerobacter brockii subsp.brockii)DSM 1457和Caldanaerobacter subterraneus subsp.tengcongensis DSM15242是公众可获得的。

Thernoanaerobacter tengcongensis的全部基因组序列已经公开(Bao et al.，Genome Res.12，689-700，2002(GenBank AE008691))。SWALL：Q8R921显示258个氨基酸的序列，描述为″hydrolases of the alpha/beta superfamily(α/β超家族的水解酶)″(AAM25001.1)。

发明概述

发明人已鉴定了厌氧嗜热细菌中具有脂肪酶活性的多肽。

因此，本发明提供水解底物中的酯键的方法，包括用脂肪酶(具有脂肪酶活性的多肽)处理所述底物。本发明还提供用于所述方法的脂肪酶和编码所述脂肪酶的多核苷酸。

所述多肽可以具有序列SEQ ID NO：2或4，或者与其中之一具有高度同一性(identity)，或者可以通过取代、缺失、和/或插入一个或多个氨基酸而从其中之一获得。

所述多核苷酸可以具有序列SEQ ID NO：1或3，或者与其中之一具有高度同一性或者可以与其中之一杂交，或者可以是存在于菌株DSM 7021、DSM 1457、或DSM 15242中的基因组的一部分，其可以用引物对LipCtTb-For LipCtTb-Rev(SEQ ID NO：5-6)或用引物对LipTtg-for和LipTtg-rev(SEQ ID NO：7-8)扩增。

本发明具体涉及如下方面：

1.水解底物中酯键的方法，其包括用脂肪酶处理所述底物，所述脂肪酶：

a)具有与SEQ ID NO：2或4具有至少70％同一性的氨基酸序列；

b)由中等严紧条件下与SEQ ID NO：1或3的互补链杂交的核酸序列所编码；

c)具有能够自SEQ ID NO：2或4通过取代、缺失、和/或插入一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列；或者

d)由存在于菌株DSM 7021、DSM 1457、或DSM 15242中的基因组的脂肪酶编码部分编码，并且能够用SEQ ID NO：5和6或用SEQ ID NO：7和8扩增。

2.项1的方法，其中所述酯键是仲醇酯键，特别是甘油三酯2-位的键。

3.脂肪酶，其

a)具有与SEQ ID NO：2具有至少90％同一性的氨基酸序列；

b)由中等或高严紧条件下与核酸序列SEQ ID NO：1的互补链杂交的核酸序列所编码；

c)具有能够自SEQ ID NO：2通过取代、缺失、和/或插入一个或多个氨基酸而获得的氨基酸序列；或者

d)由存在于菌株DSM 7021或DSM 1457中基因组的脂肪酶编码部分所编码，并且能够用SEQ ID NO：5和6扩增。

4.编码前述项的脂肪酶的多核苷酸。

5.包含选自下组序列的多核苷酸：

a)编码脂肪酶并与之具有至少90％同一性的多核苷酸；

b)编码脂肪酶并在高严紧条件下与核苷酸SEQ ID NO：1的互补链杂交的多核苷酸；

c)存在于菌株DSM 7021或DSM 1457中的基因组的脂肪酶编码部分，其能够用SEQ ID NO：5和6扩增，或者

d)a)、b)或c)的多核苷酸的互补链。

6.生产多肽的方法，包括：

a)获得编码多肽的多核苷酸，所述多肽具有来自厌氧细菌的脂肪酶的活性；

b)用所述多核苷酸转化芽孢杆菌属细胞；

c)在有助于生产所述多肽的条件下培养转化的细胞；和

d)回收所述多肽。

发明详述

基因组DNA来源