[发明专利]胰蛋白酶原-2化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体涉及一种胰蛋白酶原-2检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

急性胰腺炎(AP)为腹部外科常见病，且近年来重型胰腺炎发病率逐渐增多。急性胰腺炎对生理扰乱大，而且对各重要脏器损害明显故死亡率甚高，有时可引起骤然死亡，重型胰腺炎死亡率为20％，有并发症者可高达50％。所以，临床上需要及早和准确的诊断，以免延误病情。

对急性胰腺炎的诊断，传统为采用生化方法测定淀粉酶。但人的淀粉酶有两类同功酶，即胰腺淀粉酶和唾液淀粉酶，前者是由胰腺细胞特异分泌的，而后者可来源于唾液腺、肝细胞、乳腺、肺和女性生殖器官，并且后者的含量大于前者。传统的生化方法不能区分这两类淀粉酶，测定中造成干扰，导致误诊。急性胰腺炎一般来势凶险，诊断延误极易造成死亡。

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰腺外分泌细胞产生的蛋白水解酶，是胰液的主要成分，其前体为胰蛋白酶原。胰蛋白酶原(Trypsinogen)是一种分子量为25Kd的胰腺蛋白水解酶，由肠激酶激活。它分为两种主要同功酶，即阳离子的胰蛋白酶原-1和阴离子的胰蛋白酶原-2，两者在胰液中含量很高，正常时仅有极少量进入循环系统，但病理情况下可大量进入血液。健康人中胰蛋白酶原-1与胰蛋白酶原-2的比值为4∶1，但在急性胰腺炎时，血中胰蛋白酶原-2急剧增高，又由于它在肾小管吸收少，因此血和尿中胰蛋白酶原-2水平皆明显升高。血清胰蛋白酶原-2测定对胰腺炎的诊断具有高度的特异性，能够准确无误的做出判断，使急性胰腺炎得到及时和恰当的治疗，它同时又是病情严重程度的指标。英国利物浦皇家医学院外科最近在Lancet报导：他们比较了血中C-反应蛋白、尿中胰蛋白酶原激活肽等几种临床化学指标对急性胰腺炎的诊断、预后的意义，认为尿中胰蛋白酶原的检测对急性胰腺炎较佳，可作为临床常规应用。

所以，对急性胰腺炎的诊断，测定胰蛋白酶原-2的特异性远远高于传统的生化方法测定淀粉酶。

2000年，Clin Cancer Res中报导日本科学家认为60％晚期胃癌患者血中胰蛋白酶原十分高，这些患者常伴有淋巴结、肝转移，而且往往是分化差的腺癌。另外应用胰蛋白酶原对胆管癌、梗阻性黄疸的鉴别诊断近期也有相关报道。

胰蛋白酶原-2的检测，现有的胶体金的方法虽然操作比较简单，但需要手工操作，仅适合少量样本的检查，不适合进行大规模使用，不适合上机进行全自动的操作，容易造成误差，而且胶体金的方法对胰蛋白酶原-2的检查是定性的，无法实现定量。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)于1977年问世，上世纪九十年代，化学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏性(检测限度可达10^-15～10^-18mol/L)。化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。

化学发光免疫分析作为一种新兴的分析技术，目前尚未应用于胰蛋白酶原-2的检测。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种胰蛋白酶原-2化学发光免疫检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供所述试剂盒的临床适用范围。

本发明的试剂盒可以用于急性胰腺炎的临床诊断；本发明试剂盒还可以用于监测胰腺癌、胆囊癌、胃癌、淋巴瘤、胚胎性恶性肿瘤的发展过程。

本发明的再一目的是提供制备上述试剂盒的方法。

本发明的胰蛋白酶原-2化学发光免疫检测试剂盒包括：1)胰蛋白酶原-2抗原校准品；2)胰蛋白酶原-2抗体或链霉亲和素包被的微孔板；3)当2)中为胰蛋白酶原-2抗体包被的微孔板时，为酶标记的胰蛋白酶原-2抗体，当2)中为链霉亲和素包被的微孔板时，为酶标记的胰蛋白酶原-2抗体和生物素标记的胰蛋白酶原-2抗体；4)化学发光底物液；以及5)浓缩洗涤液。