[发明专利]胰蛋白酶原-2化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种胰蛋白酶原-2化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：1)胰蛋白酶原-2校准品；2)胰蛋白酶原-2抗体或链霉亲和素包被的微孔板；3)当2)中为胰蛋白酶原-2抗体包被的微孔板时，为酶标记的胰蛋白酶原-2抗体，当2)中为链霉亲和素包被的微孔板时，为酶标记的胰蛋白酶原-2抗体和生物素标记的胰蛋白酶原-2抗体；4)化学发光底物液；以及5)浓缩洗涤液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于标记胰蛋白酶原-2抗体的标记物为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶或生物素。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物或氨基苯二酰肼类衍生物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为AMPPD、鲁米诺或异鲁米诺或氨基苯二酰肼。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为PBST或含Tween20的Tris-HCl缓冲液。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于所述胰蛋白酶原-2抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

7.根据权利要求1～6中任意一项所述的试剂盒，所述胰蛋白酶原-2抗体来源于大鼠、小鼠、兔、山羊、绵羊、豚鼠、牛、驴、马、鸡或猴子。

8.一种制备权利要求1～7中任意一项所述试剂盒的方法，其包括以下步骤：1)配制胰蛋白酶原-2抗原校准品；2)以胰蛋白酶原-2抗体或链霉亲和素包被微孔板；3)当2)中采用胰蛋白酶原-2抗体包被微孔板时，采用酶标记胰蛋白酶原-2抗体，当2)中采用链霉亲和素包被微孔板时，采用酶标记胰蛋白酶原-2抗体并采用生物素标记胰蛋白酶原-2抗体；4)配制化学发光底物液；5)配制浓缩洗涤液；6)分装所述胰蛋白酶原-2抗原校准品、酶和/或生物素标记的胰蛋白酶原-2抗体、化学发光底物液、浓缩洗涤液；以及7)组装为成品。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述步骤2)包括以下步骤：

I)胰蛋白酶原-2抗体的准备；

II)包被

用0.01～5mol/L pH值为7.0～11.0的碳酸盐缓冲液与1～20μg/mL的胰蛋白酶原-2抗体配制成包被液，或者

配制基于1000mL包含10～90g Na₂HPO₄·12H₂O、1～50g柠檬酸的溶液，所述溶液的pH值为3～10，然后将链霉亲和素以1～20μg/mL的浓度溶解到所述溶液中，配制成包被液；

将上述包被液负载于微孔板上，包被的微孔板为48或96孔的微孔板条；

III)用生理盐水洗涤上述微孔板；

IV)封闭

配制封闭液，基于1000mL所述封闭液包含0.01～5.0g NaH₂PO₄·2H₂O、0.01～10g Na₂HPO₄·12H₂O、1～40g牛血清白蛋白和0.1～10mL生物防腐剂，所述封闭液的pH值为7.0～10，然后将所得封闭液负载于上述洗涤后的微孔板上。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于所述步骤3)中，胰蛋白酶原-2抗体酶标记物为偶联碱性磷酸酶或是辣根过氧化物酶，采用辣根过氧化物酶时，采用过碘酸钠法进行标记，采用碱性磷酸酶时，采用戊二醛交联法进行标记。

11.根据权利要求8～10中任意一项所述的方法，其特征在于所述步骤3)中，采用生物素标记胰蛋白酶原-2抗体的步骤为：①将胰蛋白酶原-2抗体在0.01～2.00mol/L pH 5～10的硼酸缓冲液中透析4～24小时，透析完毕后取出抗体装入玻璃瓶中；②称生物素10μg～1000μg溶于有机溶剂中；③将步骤①中得到的溶液与步骤②中得到的溶液混合，室温反应1～24小时，加入100μl0.5～5mol/L的氯化铵溶液。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述有机溶剂为DMF、DMSO或其组合。