[发明专利]两个阿魏酸酯酶酶活检测的新化合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于化学发明技术领域，具体涉及两个阿魏酸酯酶酶活检测的新化合物及其制备方法。

背景技术

阿魏酸酯酶(EC 3.11.73)能水解存在于植物细胞壁中的羟基肉桂酸类化合物、阿拉伯木聚糖与某些胶质之间的酯键，是半纤维素完全降解所需的关键酶之一。目前，研究者已在一些真菌和细菌中发现了多种阿魏酸酯酶。为了进一步挖掘自然界中的阿魏酸酯酶资源和改造阿魏酸酯酶的某些特性，设计阿魏酸酯酶的模拟底物并建立快速有效的酶活检测手段是许多研究者感兴趣的问题。阿魏酸酯酶有广泛的底物谱，其底物主要是对甲氧基化或(和)羟基化的肉桂酸具有基团专一性。目前，阿魏酸甲酯、阿魏酸对硝基苯酚酯、对硝基苯酚-阿拉伯呋喃糖苷-阿魏酸酯以及2-氯-对硝基苯酚-阿拉伯呋喃糖苷-阿魏酸酯等底物已报道并用于阿魏酸酯酶酶活检测。但是，用上述底物检测阿魏酸酯酶酶活存在反应灵敏度低或检测方法复杂等问题。

发明内容

为了克服现有阿魏酸酯酶酶活检测方法的缺点，本发明提供两个用于阿魏酸酯酶酶活检测的化合物，及其合成方法和检测阿魏酸酯酶酶活的方法。

本发明阿魏酸酯酶酶活检测的化合物及其合成方法如下：

1.阿魏酸2-氯-对硝基苯酚酯(化合物A)

黄色化合物，其分子式为C₁₆H₁₂ClNO₇，化学名为(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-硝基-2-氯苯基-酯；结构式为：

该化合物的鉴定：

用¹H核磁共振的方法确定该化合物：¹H NMR(CDCl₃，600MHz)δ8.39(d，1H，J＝2.7Hz)，8.21(dd，1H，J＝2.7Hz and J＝9.1Hz)，7.88(d，1H，J＝15.8Hz)，7.44(d，1H，J＝9.1Hz)，7.18(dd，1H，J＝1.7Hz and J＝8.1Hz)，7.11(d，1H，J＝1.7Hz)，6.97(d，1H，J＝8.1Hz)，6.50(d，1H，J＝15.8Hz)，3.97(s，3H).

该化合物的合成方法：

参考已报道的对阿魏酸对硝基苯酚酯的合成方法(Shyamala Hegde，et al.Single-step synthesis of 4-nitrophenyl ferulate for spectrophotometric assay of feruloyl esterases.Anal.Biochem.387(2009)，128-129)，将过量的阿魏酸和2-氯-对硝基苯酚与吡啶(Pyr)，三乙胺(TEA)，DCC加入到二氧杂环乙烷中，室温搅拌反映24小时或更长时间至2-氯-对硝基苯酚消耗完全，过滤反映混合物并回收过滤液。将过滤液蒸馏干燥后溶于乙酸乙酯并加入硅胶蒸馏干燥。用柱层析的方法纯化阿魏酸2-氯-对硝基苯酚酯。反应中所用试剂均可在供应商处买到，通过一步反应获得化合物A。

反应路径为：

反映试剂及反映条件：1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC)，吡啶(Pyr)，三乙胺(TEA)，室温搅拌24小时，80％产率。以上所用化合物都可在供应商处买到，通过一步获得化合物A。

2.7-羟基香豆素-阿拉伯呋喃糖苷-阿魏酸酯(化合物B)

浅黄色底物，分子式为C₂₄H₂₂O₁₀，化学名为(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-(2S，3R，4R，5S)-3，4-二羟基-5-(二氢色满-2-酮-7-氧基)四氢呋喃-2-甲基-酯。结构式为：

该化合物的鉴定：