[发明专利]畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量的测定方法。

背景技术

胆固醇分为高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇两种，高密度脂蛋白胆固醇可减少患冠状动脉心脏病的危险，被称为“好”胆固醇；低密度脂蛋白胆固醇会增加患冠状动脉心脏病的危险，被称为“坏”胆固醇。人体内的胆固醇有两个来源，一是内源合成，二是来自动物性食物。近年来，随着生活水平的提高，动物性食物在人们膳食中占的比例逐渐增大，外源的胆固醇摄入过多，诱发了各种心血管疾病。为此，科研工作者研发了高密度脂蛋白胆固醇含量高、低密度脂蛋白胆固醇含量低的畜禽肉，使人们在不降低生活质量的同时降低患心血管疾病的风险。目前，国内还没有测定畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇的含量的标准方法，一些科研工作者常借鉴医学上测血液中高低密度脂蛋白胆固醇的方法进行测定，首先将畜禽肉加一定比例的生理盐水进行匀浆，然后离心取上清液，测上清液中两种胆固醇的含量。由于胆固醇不溶于水，上述方法测定的两种胆固醇的含量只是畜禽肉渗出液中的含量，它是畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇的部分值，并非畜禽肉中两种胆固醇含量的真值。

发明内容

为了测定畜禽肉中两种胆固醇含量的真值，申请人广泛查阅了相关资料，进行了相关试验技术的集成创新，通过大量的试验研究，建立了一种畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，为客观准确地评价畜禽肉提供了新方法。

本发明的技术方案是：畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，然后用磷钨酸-氯化镁沉淀剂将其中的高密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。具体步骤为：

(1)皂化

取0.1～1.5克畜禽肉，用0.5～1.5mol/L的氢氧化钾和无水乙醇在75℃～95℃水浴上皂化至澄清；所述氢氧化钾和无水乙醇的体积比为1∶1；

(2)胆固醇提取

然后将皂化后的溶液用乙醚提取3次，之后用蒸馏水洗涤3次，无水硫酸钠干燥乙醚层，用高纯氮吹干或真空干燥箱烘干后，加入无水乙醇溶解提取出的胆固醇；

(3)高密度脂蛋白胆固醇的分离

然后用磷钨酸-氯化镁配成的沉淀剂和胆固醇溶液等体积混合均匀，静置、离心、过滤，即得高密度脂蛋白胆固醇溶液；所用磷钨酸-氯化镁沉淀剂：pH为6.1±0.1，磷钨酸含量为4.4克/升，氯化镁含量为11克/升；

(4)测定与计算

最后，用气相色谱仪外标法测高密度脂蛋白胆固醇溶液中高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，通过公式：X＝c×A×V×100/A_S/m/1000(X：试样中高脂蛋白胆固醇的含量，单位为毫克每百克；c：标准工作液中胆固醇的浓度，单位为微克每毫升；A：试样溶液中胆固醇的峰面积；V：试样溶液最终定容的体积，单位为毫升；A_S：标准工作液中胆固醇的峰面积；m：肉样的质量，单位为克。)计算出畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的含量。

本发明的技术方案是：畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，首先是将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，用檬酸钠-肝素沉淀剂将其中的低密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出低密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。具体步骤为：

(1)皂化

取0.1～1.5克畜禽肉，用0.5～1.5mol/L的氢氧化钾和无水乙醇在75℃～95℃水浴上缓慢皂化至溶液澄清；所述氢氧化钾和无水乙醇的体积比为1∶1；

(2)胆固醇提取

然后将皂化后的溶液用乙醚提取3次，之后用蒸馏水洗涤3次，无水硫酸钠干燥乙醚层，用高纯氮吹干或真空干燥箱烘干后，加入无水乙醇溶解提取出的胆固醇；

(3)低密度脂蛋白胆固醇的分离

用柠檬酸钠-肝素配成的沉淀剂和胆固醇溶液等体积混合、静置、离心、过滤，即得低密度脂蛋白胆固醇溶液；所用试剂柠檬酸钠-肝素沉淀剂：pH为5.12±0.02，柠檬酸钠的含量为18.8克/升，肝素的含量为12500U/升。

(4)测定与计算