[发明专利]畜禽肉中高、低密度脂蛋白胆固醇含量的测定方法

权利要求书

1.畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，然后用磷钨酸-氯化镁沉淀剂将其中的高密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。

2.如权利要求1所述的畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，

(1)皂化

取畜禽肉，用0.5～1.5mol/L的氢氧化钾和无水乙醇在75℃～95℃水浴上皂化至澄清；所述氢氧化钾和无水乙醇的体积比为1∶1；

(2)胆固醇提取

然后将皂化后的溶液用乙醚提取3次，之后用蒸馏水洗涤3次，无水硫酸钠干燥乙醚层，用高纯氮吹干或真空干燥箱烘干后，加入无水乙醇溶解提取出的胆固醇；

(3)高密度脂蛋白胆固醇的分离

然后用磷钨酸-氯化镁沉淀剂和胆固醇溶液等体积混合均匀，静置、离心、过滤，即得高密度脂蛋白胆固醇溶液；所用磷钨酸-氯化镁沉淀剂：pH为6.1±0.1，磷钨酸含量为4.4克/升，氯化镁含量为11克/升；

(4)测定与计算

最后，用气相色谱仪外标法测高密度脂蛋白胆固醇溶液中高密度脂蛋白胆固醇的峰面积，通过公式：X＝c×A×V×100/A_S/m/1000，计算出畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的含量；所述公式中其中X：试样中高脂蛋白胆固醇的含量，单位为毫克每百克；c：标准工作液中胆固醇的浓度，单位为微克每毫升；A：试样溶液中胆固醇的峰面积；V：试样溶液最终定容的体积，单位为毫升；A_S：标准工作液中胆固醇的峰面积；m：肉样的质量，单位为克。

3.如权利要求1或2所述的畜禽肉中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，所述气象色谱仪的气相色谱条件为：

色谱柱：DB-5弹性石英毛细管柱；

载气：99.99％氮气，恒流2.4毫升/分钟；

柱温：初始温度200℃，1分钟后，以30℃/分钟升至280℃，保持10分钟；

进样口温度：280℃；

检测器温度：290℃；

进样量及方式：1微升不分流进样；

空气流速：350毫升/分钟；

氢气流速：30毫升/分钟。

4.畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，首先是将畜禽肉中的脂类用氢氧化钾和无水乙醇皂化，胆固醇作为不皂化物用无水乙醚提取出来，用檬酸钠-肝素沉淀剂将其中的低密度脂蛋白胆固醇分离出来，最后用气相色谱仪测出低密度脂蛋白胆固醇的峰面积，根据峰面积计算其含量。

5.如权利要求4所述的畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，

(1)皂化

取畜禽肉，用0.5～1.5mol/L的氢氧化钾和无水乙醇在75℃～95℃水浴上缓慢皂化至溶液澄清；所述氢氧化钾和无水乙醇的体积比为1∶1；

(2)胆固醇提取

然后将皂化后的溶液用乙醚提取3次，之后用蒸馏水洗涤3次，无水硫酸钠干燥乙醚层，用高纯氮吹干或真空干燥箱烘干后，加入无水乙醇溶解提取出的胆固醇；

(3)低密度脂蛋白胆固醇的分离

用柠檬酸钠-肝素配成的沉淀剂和胆固醇溶液等体积混合、静置、离心、过滤，即得低密度脂蛋白胆固醇溶液；所用试剂柠檬酸钠-肝素沉淀剂：pH为5.12±0.02，柠檬酸钠的含量为18.8克/升，肝素的含量为12500U/升；

(4)测定与计算

最后用气相色谱仪外标法测低密度脂蛋白胆固醇溶液中低密度脂蛋白胆固醇的峰面积，通过公式：X＝c×A×V×100/A_S/m/1000计算出畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的含量；所述公式中其中X：试样中高脂蛋白胆固醇的含量，单位为毫克每百克；c：标准工作液中胆固醇的浓度，单位为微克每毫升；A：试样溶液中胆固醇的峰面积；V：试样溶液最终定容的体积，单位为毫升；A_S：标准工作液中胆固醇的峰面积；m：肉样的质量，单位为克。

6.如权利要求4或5所述的畜禽肉中低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征是，所述气象色谱仪的气相色谱条件为：

色谱柱：DB-5弹性石英毛细管柱；

载气：99.99％氮气，恒流2.4毫升/分钟；

柱温：初始温度200℃，1分钟后，以30℃/分钟升至280℃，保持10分钟；

进样口温度：280℃；

检测器温度：290℃；

进样量及方式：1微升不分流进样；

空气流速：350毫升/分钟；

氢气流速：30毫升/分钟。