[发明专利]提纯红霉素A的改进方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种红霉素A的提纯方法，具体地说，涉及一种采用大孔树脂吸附法从发酵液中提纯红霉素A的方法。

背景技术

红霉素(Erythromycin，简称EM)是从红霉素链霉菌发酵而得的一种大环内酯类广谱抗生素，是目前主要的抗生素产品之一。红霉素中存在红霉素A、B和C等多种不同的异构体，其化学性质与结构都很相似，但是其中红霉素A的抗菌活性较强，毒性较低，为医用红霉素的主要抗菌活性成分。

在红霉素A的提取精制方面，树脂吸附法与传统的溶剂萃取法相比，具有溶媒损耗小、操作简便、环境污染少等优点，日益受到重视。

现有涉及采用树脂吸附法从发酵液中提纯红霉素A的方法的文献有：中国抗生素杂志2007，32(5).284-286，315和专利文献CN 101367855，由其所揭示的技术方案可知，现有技术主要存在的缺陷是：(1)第1BV红霉素洗脱率较低，(2)未涉及发酵液中色素和蛋白等杂质的去除方法(如此会影响最终产品的质量)，(3)对吸附柱的再生，未考虑发酵液中杂质的脱除效果，再生效果不佳。

鉴于此，本发明提供一种采用树脂吸附法从发酵液中提纯红霉素A的方法，克服现有技术中存在的缺陷。

发明内容

本发明所述的从发酵液中提纯红霉素A的方法，包括如下步骤：

(1)树脂吸附

以红霉素发酵液为原料，经膜过滤后所得滤液调整其pH值至9.0～10.0后进行固定床非极性大孔吸附树脂吸附，控制红霉素吸附量为非极性大孔吸附树脂饱和吸附量的60％～70％(在吸附过程中若滤液pH有所下降，则即时进行调整，使其始终不低于9.0)；

(2)树脂洗涤

用pH值为8.0～11.0的含0.05mol/L(B₄O₇)^2-的硼砂-NaOH缓冲溶液或其与能够与水互溶或者部分互溶的有机溶剂【如(但不仅限于)醇类、酮类、醚类或酯类等，优选为丙酮】组成的混合溶液(在所述的混合溶液中，有机溶剂含量优选为1v/v％～5v/v％)作为洗涤剂，在40℃条件下，对步骤(1)中非极性大孔吸附树脂进行洗涤，当固定床层出口处瞬时流出液的pH值与洗涤剂的pH值相同时，停止洗涤；

(3)树脂洗脱

对经步骤(2)洗涤的非极性大孔吸附树脂，先用1BV(BV为固定床层体积)去离子水过柱(顶洗掉床层内的洗涤剂)，然后用乙酸丁酯作为洗脱剂进行洗脱；

(4)洗脱液成盐

对由步骤(3)所得的第一个1BV洗脱液中的红霉素A结晶、干燥后得目标产品；

所述的非极性大孔吸附树脂，包括：美国Rohm-hass公司产品Amberlite XAD16或Amberlite XAD 1600、或日本三菱公司产品SEPABEADS SP207或SEPABEADS SP825以及性质类似的国产吸附树脂等。

上述步骤(2)中选择硼砂-NaOH缓冲溶液的原因在于：(1)实验发现红霉素滤液中的色素类分子易溶于碱性溶液，且其中的蛋白质分子大多呈酸性，故以碱性缓冲溶液洗去吸附树脂中的色素、蛋白等杂质效果最好；(2)缓冲溶液中较高的、稳定的pH值有利于将吸附在树脂上的红霉素A在短时间内进一步转为呈分子态的游离碱而不产生碱性破坏，增加了后续洗脱过程的洗脱率；(3)相比于其它用有机酸或有机碱配置的缓冲溶液，此缓冲溶液价格便宜，节约生产成本；(4)此缓冲溶液中含有较高的Na⁺离子强度，Na⁺的水和作用可以有效降低红霉素A在水溶液中的溶解度，减少洗涤过程中红霉素A的损失；(5)上柱吸附的红霉素滤液中含有高价离子(如Ca²⁺、Mg²⁺和Fe²⁺等)，不能使用含有碳酸根离子的缓冲溶液。

此外，本发明所述的从发酵液中提纯红霉素A的方法，还包括所用的非极性大孔吸附树脂的再生步骤，具体包括如下步骤：

对步骤(3)中洗脱完毕的非极性大孔吸附树脂，先用1BV丙酮过柱，顶洗掉床层内的乙酸丁酯，然后用由浓度为0.1mol/L～1.0mol/L的NaOH水溶液与能够与水互溶或者部分互溶的有机溶剂【如(但不仅限于)：醇类、酮类、醚类或者酯类等，优选为丙酮】组成的混合溶液(在所述的混合溶液中，有机溶剂含量优选为20v/v％～80v/v％)对所用的非极性大孔吸附树脂进行再生。

本发明的积极效果是：