[发明专利]黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条，其特征在于：包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述检测线包被有黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶联物，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，所述抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO. C201018的杂交瘤细胞株2C9产生。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条，其特征在于：所述的吸水垫长16～18mm，宽2～4mm；检测垫长25～30mm，宽2～4mm；金标垫长6～9mm，宽2～4mm；样品垫长12～18mm，宽2～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm。

3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm。

4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为75～375ng；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为50～500ng。

5.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条，其特征在于：所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15～20nm；所述金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的用量为200～600ng。

6.根据权利要求1或2所述的黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)吸水垫的制备

将吸水纸剪裁即得吸水垫；

(2)检测垫的制备

检测线的包被：

将黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白的偶联物配制成0.1～0.5mg/mL的包被液A；于距离硝酸纤维素膜上沿为15～20mm的位置，用点喷方式将包被液A横向包被于硝酸纤维素膜上得到检测线，每厘米检测线上所需黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白的偶联物(AFM1-BSA)的包被量为75～375ng，然后于37～40℃条件下干燥5～20分钟；

质控线的包被：

将兔抗鼠多克隆抗体配制成0.1～0.5mg/mL的包被液B；于距检测线5～10mm的位置，用点喷方式将包被液B横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线，每厘米质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为50～500ng，然后于37～40℃条件下干燥5～20分钟；

(3)样品垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液A中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥4～10小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；

(4)金标垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液B中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥4～10小时，于已干燥的玻璃纤维膜上，用点喷方式将纳米金标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体溶液横向进行喷涂，每厘米喷涂长度所需纳米金标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体为200～600ng，然后真空冷冻干燥2～6h，置干燥器中室温保存；

所述的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO. C201018的杂交瘤细胞株2C9产生；

(5)试纸条的组装

在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为1～3mm，即得黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条。

7.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素M1免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述的包被液A是按照下述方法配制得到的：将10～50mg市售黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶联物(AFM1-BSA)，1～2g牛血清白蛋白，0.02～0.05g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至100mL所得；

所述的包被液B是按照下述方法配制得到的：将10～50mg兔抗鼠多克隆抗体，0.02～0.05g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至100mL所得。