[发明专利]一种制备奶牛性别控制精子的方法

权利要求书

1.一种制备奶牛性别控制精子的方法，其特征在于，在奶牛精子分离之前的缓冲液中加入2-O-葡糖糖苷抗坏血酸，然后用流式细胞分离仪分离奶牛精子，将分离得到的奶牛性别控制精子回收到含有2-O-葡糖糖苷抗坏血酸的冷冻液中。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述2-O-葡糖糖苷抗坏血酸在缓冲液中的终浓度为150-250μM。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述2-O-葡糖糖苷抗坏血酸在缓冲液中的终浓度为200μM。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述2-O-葡糖糖苷抗坏血酸在所述冷冻液中的浓度为150-250μM。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述2-O-葡糖糖苷抗坏血酸在所述冷冻液中的浓度为200μM。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取一定量奶牛原精液，用Hepes缓冲液稀释至200×10⁶精子/mL，然后加入荧光染料烟酸己可碱至终浓度为0.11mM及2-O-葡糖糖苷抗坏血酸至终浓度为150-250μM，在34℃水浴中染色45min；

2)用含有重量体积比4％提纯卵黄和重量体积比5％食品红的Hepes缓冲液进一步稀释至100×10⁶精子/mL；

3)然后用流式细胞分离仪进行奶牛精子分离，回收分离得到的奶牛性别控制精子，并收集在含有150-250μM 2-O-葡糖糖苷抗坏血酸的冷冻液中；当精子收集到8×10⁶精子时，立刻在4℃温度、840g下离心20min，弃掉上清；

4)用含有AA-2G的冷冻液重新悬浮沉淀物，以每管精子密度3×10⁶精子0.25ml细管装管，密封。