[发明专利]miR-34c在制备治疗或预防肝癌的药物或保健品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及非编码小RNA基因miR-34c及其靶基因TGIF₂的应用，特别涉及其在早期诊断、预防和治疗原发性肝癌尤其是在HBV感染引起的原发性肝癌方面的应用。

背景技术

原发性肝细胞癌(HCC)是世界常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率较高，严重危害着人们的健康，目前，早期诊断除B超、CT等影像学检查外，甲胎蛋白(AFP)是最常用的检测手段，但有时出现漏诊和误诊，并且尚无满意的治疗。

乙型肝炎病毒(HBV)感染被认为是HCC发生的最主要原因。全球HCC病例的60％，流行地区病例的70％被认为是由HBV引起的。HBV引起原发性肝癌的发生机制极其复杂。

研究表明，在某些病毒感染过程中，病毒可以通过自身合成的或利用宿主的特定miRNAs，调节病毒或宿主的基因表达，利于病毒的生存、传播，或使病毒逃逸宿主的免疫反应，从而导致肿瘤等疾病的发生^[1]，因此miRNAs在病毒感染的诊断和相关肿瘤的治疗中可能具有广泛的应用前景。

miRNA是一类长约21-24nt的非编码单链成熟RNA，在生物进化上高度保守，其与靶基因的特异序列结合，使靶基因降解或干扰靶蛋白的翻译来调节基因的表达，大量证据表明，miRNA参与细胞的增殖、分化及凋亡的调节，与肿瘤等疾病的发生发展密切相关^[2-3]。

人类miR-34包括miR-34a、miR-34b和miR-34c等，可通过被p53激活，抑制E2F3、Bcl-2、c-myc、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及Cyclin E2的表达，使肿瘤细胞停滞在G1期，抑制肿瘤细胞的生长，诱导肿瘤细胞凋亡，并通过E2F3、SIRT1与p53形成正反馈环路，不断增强其自身和p53的作用。miR-34家族的非正常表达已被证实出现在多种的肿瘤中。Welch等^[4]对儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma)的研究发现，定位于1p36.23的mir-34a基因经常缺失，位于该部位的另一肿瘤抑制因子CHD5 chromodomain protein能够通过ARF CDKN2A激活p53，因此1p36的缺失可影响p53通路的完整性。miR-34b与miR-34c的最小程度缺失被Calin等^[5]证明同样存在于乳腺癌和肺癌中。Chang等^[6]发现miR-34a的表达在胰腺癌肿瘤细胞中缺失；Tazawa等^[7]证实miR-34a的下调存在于人类结肠癌的发展过程中；Bommer等^[8]对非小细胞型肺癌进行检测，发现miR-34家族在非小细胞型肺癌的表达很大程度上降低了该肿瘤的发生，同时恢复miR-34基因表达能够抑制非小细胞型肺癌细胞的生长。

近年来多项研究表明miR-34与肝癌的发生发展密切相关。Igor P.Pogribny等^[9]在长期给予他莫昔芬药物的大鼠肝癌组织中发现miR-34显著下调。Volodymyr P.Tryndyak等^[10]通过amethyl-deficient diet方法诱导建立大鼠的肝癌模型，经qRT-PCR检测发现miR-34a低表达。Na Li等^[11]研究发现在肝癌组织和HepG2肝癌细胞系中，miR-34a表达显著下调，并发现miR-34a可通过下调c-met的表达来抑制肝癌细胞的转移和浸润。然而Pascal Pineaua等^[12]通过Microarray analysis显示miR-34a在HCC中显著高表达。从以上研究可见因不同诱发因素产生的肝癌细胞中miR-34s的表达亦不同，miR-34在肝癌的发生发展过程中可能充当着癌基因和(或)抑癌基因的角色。

目前对miR-34家族的研究主要针对miR-34a进行的，由miR-34a推导产生的结论是否同样适用于miR-34b/c目前还难以确定。很少有报道miR-34在肝癌中的研究，并且尚无miR-34对HBV感染及其相关肝癌的基因调控机制的研究。因此阐明miR-34c在HBV感染及其相关肝癌的基因调控机制中的作用是非常有必要的。

发明内容