[发明专利]鉴定发热伴出疹症候群传染病相关病毒病原体的多重实时定量PCR的引物、探针及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于检测和鉴定发热伴出疹症候群传染病病毒病原体的引物、探针、试剂盒和检测方法。

背景技术

发热伴出疹症候群传染病是指发热伴出疹，发热≥37.5℃，持续一天以上，伴有全身或局部皮肤或粘膜出疹。其病毒病原体主要包括肠道病毒（Enterovirus, EV）、风疹病毒（Rubella virus, RV）、麻疹病毒（Measles virus, MV）、登革病毒（Dengue virus, DEV）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、人类DNA细小病毒（HPV B19）、肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16型（Cox A16）等。

发热伴出疹症候群一般以症状进行临床诊断。部分轻症和不典型病例则需进行微生物学检查以求确诊，病毒分离、血清学诊断及病毒核酸检查是其确切的诊断方法。在实际临床工作中，由于发热伴出疹症候群具有不同的毒力，且均具有一定的传染性。因而发热伴出疹症候群的快速诊断就成为提高治疗效果和控制病毒扩散的关键。传统的分离培养及血清学检测方法费时繁琐，导致检测不及时，灵敏度不够，因此迫切需要开发快速正确检测的新技术以筛查可疑病例、控制疫情蔓延和及时给予对症治疗。分子生物学检测手段的介入，使这种需要成为了可能。实时荧光定量PCR具有快速检测、减少污染、准确定量、灵敏度高和特异性强的优点，多重定量PCR则可同时检测多种病毒病原，两者相结合的多重实时定量PCR（multiplex real-time quantitative polymerase chain reaction）集合了两者的优点，更由于减少了酶和荧光染料或探针的使用量，降低了成本。故本研究建立了单管荧光RT - PCR同时检测4种发热伴出疹症候群病毒病原体，两管即可全部检测以上8种发热伴出疹症候群病毒病原体，并应用于临床标本的检测。

发明内容

为了克服现有技术缺陷，本发明提供了一种能用于检测和鉴定发热伴出疹症候群传染病相关病毒病原体的多重实时定量PCR的引物。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于检测和鉴定发热伴出疹症候群传染病相关病毒病原体的多重实时定量PCR的引物，检测和鉴定的对象包括水痘-带状疱疹病毒、人类小DNA病毒B19、肠道病毒、登革热病毒、风疹病毒和麻疹病毒，所述肠道病毒包括肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型；

第1组引物用于检测和鉴定肠道病毒的通用引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列；

第2组引物用于检测和鉴定风疹病毒的通用引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：4所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：5所示核苷酸序列；

第3组引物用于检测和鉴定麻疹病毒的通用引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：7所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：8所示核苷酸序列；

第4组引物用于检测和鉴定登革病毒的通用引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：10所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：11所示核苷酸序列；

第5组引物用于检测和鉴定水痘-带状疱疹病毒的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：13所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：14所示核苷酸序列；

第6组引物用于检测和鉴定人类小DNA病毒B19的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：16所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：17所示核苷酸序列；

第7组引物用于检测和鉴定肠道病毒中的肠道病毒71型的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：19所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：20所示核苷酸序列；

第8组引物用于检测和鉴定肠道病毒中的柯萨奇病毒A16型的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：22所示核苷酸序列，其下游引物如SEQ ID NO：23所示核苷酸序列。

本发明的第二个目的是提供一种用于检测和鉴定发热伴出疹症候群传染病相关病毒病原体的多重实时定量PCR的探针，检测和鉴定的对象包括水痘-带状疱疹病毒、人类小DNA病毒B19、肠道病毒、登革热病毒、风疹病毒和麻疹病毒，所述肠道病毒包括肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型；

第1组引物用于检测和鉴定肠道病毒的探针核苷酸序列，其特征在于如SEQ ID NO：3所示核苷酸序列，该序列5’端荧光标记为Cy5，3’端荧光标记为BHQ3。