[发明专利]一对基于gyrB基因的沙门氏菌PCR快速检测引物

说明书

 

技术领域

本发明属于致病菌检测技术领域，具体涉及一对基于gyrB基因，能够快速检测沙门氏菌的PCR引物。

背景技术

沙门氏菌是导致食物中毒和食源性疾病的主要病原菌之一，由于沙门氏菌导致的疾病发病率正在逐年上升。2008年美国圣保罗沙门氏菌感染疫情爆发，沙门氏菌蔓延至23个州，228人感染，其中造成一人死亡。我国国家质量监督检验检疫总局明确规定沙门氏菌为必检项目。因此准确、快速地检测食物及环境中的沙门氏菌，对于沙门氏菌防治具有十分重要的意义。

现有技术中，运用PCR方法已经成为快速检测沙门氏菌的方法之一，但是由于所选用引物的基因通常是功能基因，因此并不能把沙门氏菌属的所有沙门氏菌均检测出来，因此有一定的局限性。

gyrB基因即促旋酶（gyrase）的B亚单位基因，属于信息通路中与DNA复制、限制、修饰或修复有关的蛋白编码基因。gyrB基因序列全场约1.2~1.4kb，平均碱基替换率为每100万年变化0.7%~0.8%，比16S rDNA的每5000万年变化1%的速度快。另外，由于其作为蛋白编码蛋白，其所固有的遗传密码子的兼并性使得DNA序列可以发生较多的变异而不改变氨基酸序列，尤其是密码子的第三位碱基，这就使得gyrB基因序列在鉴定细菌近缘种方面，具有较高的分辨率。1995年，Yamamoto等根据大肠杆菌、恶臭假单胞菌和枯草芽孢杆菌的GyrB亚蛋白两端的保守氨基酸序列设计兼并引物，并对不同的种群的细菌进行扩增，研究结果表明：这组引物可以扩增（G+C）含量低的革兰氏阳性菌、大部分革兰氏阴性菌。Lzumi等通过分析9株变形假单胞菌的gyrB基因序列，设计出特异性引物，并对肠道和肾脏样品进行PCR分析，结果表明，此种方法可以快速检测由变形假单胞菌引起的疾病。目前，gyrB基因序列分析在蛭弧菌属、芽孢杆菌属、巴氏肺炎球菌属和苯酚分解菌等相近菌株的快速检测中效果显著。

发明内容

技术问题：本发明提供了一对基于gyrB基因，能够快速检测沙门氏菌的PCR引物，此对引物能够高效、快速地检测出试样中含有的各种沙门氏菌。

技术方案：提供了一对gyrB基因，能够快速检测沙门氏菌的PCR引物，该引物包括如下基因序列：

S-P-for ：5’-GGTGGTTTCCGTAAAAGTA-3’

S-P-rev ：5’-GAATCGCCTGGTTCTTGC-3’

有益效果：与现有技术相比，本发明的引物具有检测周期短、操作简单、结果可靠及灵敏度高等优点，有助于对人和动物常见所有沙门氏菌病的早期临床诊断，并对于公共卫生，畜牧兽医和口岸检疫中的致病性沙门氏菌的检出具有重要意义。

附图说明

图1 是应用本发明沙门氏菌PCR快速检测引物的检测准确性结果图。

图2 是应用本发明沙门氏菌PCR快速检测引物的检测灵敏度结果图。

具体实施方式

实施例：

1、引物的设计：通过分别对所有已知的沙门氏菌基因组序列进行比较分析，选择无二级结构且高度保守的区段（沙门氏菌gyrB基因），设计多对引物，引物长度一般为20个碱基左右，引物间和引物内无互补序列。最优引物组合如下：

S-P-for ：5’-GGTGGTTTCCGTAAAAGTA-3’

S-P-rev ：5’-GAATCGCCTGGTTCTTGC-3’

2、现采用该引物，对7株常见沙门氏菌进行检测，同时以6株粪便中常见的其它致病菌株做为对照，来验证本发明快速检测引物的准确性及灵敏度。