[发明专利]解磷恶臭假单胞菌L13及其发酵工艺

权利要求书

1.一株具有解磷能力的恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)L13，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：2010342。

2.一种解磷恶臭假单胞菌L13的发酵方法，其特征在于包含如下步骤：

(1)制备一级种子：取保藏号为CCTCC NO：2010342的恶臭假单胞菌L13斜面种子在LB培养基平板上划线，置28℃培养箱培养14h，出现游离单菌落，得到一级种子；

(2)制备二级种子液：用接种环取一环步骤(1)的一级种子的单菌落，接种于50mL的LB液体培养基的250mL摇瓶中，培养温度为28℃，摇床转速为200rpm，培养时间为12h，OD₆₀₀达到2.0，得到二级种子液；

(3)发酵培养：取步骤(2)的二级种子液以V/V计为0.5～3％的接种量接入装有20～40mL发酵培养基的250mL摇瓶中进行发酵培养，控制摇床温度为26～30℃，转速为160～200rpm，起始pH为6.8～7.6，发酵周期为36～60h，得到恶臭假单胞菌；或

取步骤(2)的二级种子液以V/V计为0.5～3％的接种量接入装有按V/V计的40～60％发酵培养基的发酵罐中，控制发酵温度为26～30℃，通气量为0.2～0.4vvm，转速为400～800rpm，pH为6.5～7.0，发酵周期为36～60h，得到恶臭假单胞菌；

其中：

发酵培养基的组分、配制及使用方法如下：

葡萄糖10～40g/L，玉米浆1～3g/L，(NH₄)₂SO₄1～3g/L，MgSO₄.7H₂O 0.1～0.5g/L，KCl 0.1～0.3g/L；余量为水；在所述的摇瓶发酵培养中扣除10倍磷酸盐缓冲液的体积；

10倍磷酸盐缓冲液的配制方法如下：称取35.6g的磷酸氢二钠，加蒸馏水定容至100ml，配制成磷酸氢二钠溶液，为溶液1；再称取27.6g磷酸二氢钠，加蒸馏水定容至100ml，配制成磷酸二氢钠溶液，为溶液2；取85ml溶液1和15ml溶液2，混合，即得到10倍磷酸盐缓冲溶液；在121℃高压蒸汽下灭菌20min，备用；

所述的10倍磷酸盐缓冲液在摇瓶发酵的发酵培养基中添加量按V/V计为6～10％；在发酵罐发酵的发酵培养基中不加入。