[发明专利]一种乳杆菌多糖分离纯化的方法

权利要求书

1.一种乳杆菌多糖分离纯化的方法，由下列步骤实现：

(1)乳杆菌发酵及其菌体浓缩：将乳杆菌种子液接入已经灭菌后的每100ml培养基中含有：大豆蛋白胨1-1.5g，鱼胨1-1.5，葡萄糖2g，牛肉膏0.5-2g，酵母膏0.5-2g，K₂HPO₄0.2-0.6g。经35-38℃厌氧发酵后，再经离心浓缩即获得乳杆菌菌体浓缩物。

(2)细胞破壁：将该乳杆菌菌体浓缩物加蒸馏水或生理盐水(1∶3-1∶5)，使用高压细胞破碎机操作压力100MPa左右以高压破碎菌体细胞壁。

(3)脱脂：将破壁粉碎乳杆菌菌体，用有机溶剂以常规方式脱脂；

(4)水提：步骤(1)所得的脱脂后乳杆菌菌体粉末按1∶6％(g/ml)的料液比加入蒸馏水，室温下浸提20～25小时；以3000～5000rpm离心15～30min，取上清液，得乳杆菌多糖水提物溶液；

(5)去蛋白：步骤(2)所得的乳杆菌多糖水提物溶液用有机溶剂以常规方式去除其蛋白；

(6)透析：步骤(3)所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24小时，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集乳杆菌多糖的提取液；

(7)纯化：将经步骤(4)透析后的液体浓缩，经DEAE纤维素-52和葡聚糖凝胶层析，收集液用苯酚硫-酸法检测，合并多糖峰的收集液，真空冷冻干燥，得纯乳杆菌多糖。

2.权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征在于乳杆菌为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌中的一种或多种。

3.如权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(1)所述有机溶剂是甲醇。

4.如权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(2)所述浸提时间是24小时。

5.如权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(2)所述离心速度是5000rpm，离心时间是15min。

6.如权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(3)所述有机溶剂是氯仿和正丁醇。

7.如权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(5)所述DEAE纤维素-52层析柱(3.5×40em)，上样量30ml，洗脱液是0～0.5mol/L的NaHCO₃。

8.如权利要求1说述的乳杆菌多糖的分离纯化方法，其特征是，步骤(5)所述葡聚糖凝胶(SephadexG-100和SephadexG-75)层析柱为3.5×100cm和1.6×100cm两种规格。上样量分别为30ml和4ml，洗脱液均是0.1mol/L的NaCl。