[发明专利]一种用于检测猪瘟病毒的试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及猪瘟病毒的检测方法，具体说是一种RT-PCR一步法用于检测猪瘟病毒的试剂盒，本发明还包括该试剂盒的检测方法。

背景技术

古典猪瘟(Classical swine fever，CSF)简称猪瘟，是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的猪的急性、烈性、接触性传染病，我国是猪瘟严重的流行国家之一，每年因猪瘟造成的直接经济损失有数十亿元，严重威胁我国养猪业及其国际贸易的发展。我国是世界上养猪最多的国家，养猪业已成为我国畜牧业的一大支柱产业，但每年因感染猪瘟死亡的猪就占饲养总量的2％～5％，引起的经济损失每年在20亿～50亿左右。我国采取接种猪瘟兔化弱毒疫苗的方法来预防和控制猪瘟的流行，已经成功的控制了猪瘟的大爆发。然而，猪瘟的流行特点却从大流行转变为地方性流行和散发，并且不分季节的随时发生。临床特点也从典型猪瘟转变为非典型性猪瘟，诊断和预防难度越来越大，因此猪瘟仍是威胁养猪户的头号传染病。

国外和国内均已建立了RT-PCR(反转录-聚合酶链反应)检测方法。国外应用PCR诊断CSFV已取得很大进展，许多学者根据CSFV序列，设计了不同引物，建立了检测CSFV核酸的套式RT-PCR方法。该方法直接从猪的脾脏、血清、淋巴结及肉品等中扩增出预期的片断，但该方法仅应用了两对引物，通过两次PCR扩增产生一个核苷酸片段。因此检测一份样品需耗时7小时，即耗时又耗力。另外，RNA(核糖核酸)病毒具有高度变异能力，一个片段不足以解决此问题，同时CSFV是一种高度传染性的病毒，因此现有的检测方法不具有快速，敏感和准确的特点，需要研制并开发出快速，敏感、准确以及价格便宜的CSFV检测试剂盒和检测方法，以弥补我国在CSFV检测上的薄弱环节，同时有利于剔除隐性带毒动物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有检测方法不能适应快速、敏感和准确的检测需求，从而提供一种能够快速、敏感、准确地检测病毒的一种用于检测猪瘟病毒的试剂盒，本发明还提供该试剂盒的检测方法。

为解决上述问题，本发明采用了下述技术方案：

一种用于检测猪瘟病毒的试剂盒，包含RNA酶抑制剂、AMV(禽成髓细胞性白血病病毒)逆转录酶、Taq酶(耐热脱氧核糖核酸聚合酶)、无RNA酶水、OneStep RNA PCR(一步RNA聚合酶链反应)混合液、阴、阳性对照以及序列SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：6引物的混合物。

所述序列SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6引物混合物的包括：

619bp条带的引物序列为：

SEQ ID NO：1：上游引物TCAGGGGGATGTGCAGAGATGTGT

SEQ ID NO：2：下游引物GCTTTTTCCGCGCCTGATTGATA 395bp条带的引物序列为：

SEQ ID NO：3：上游引物CCGCCGGTGATTTCGTG

SEQ ID NO：4：下游引物ACTGCCTCTTTGCCCTTTCCTTAT 274bp条带的引物序列为：

SEQ ID NO：5：上游引物CTGGCCAAGAGGGGTGAGC

SEQ ID NO：6：下游引物ACAGGCCGTCTTGGGTATTC

所述引物混合物序列为：

序列SEQ ID NO：1至SEQID NO：6的向5’端和/或3’端延长的序列；

619bp(NO：7)

tcagggggatgtgcagagatgtgtggaagccatgaccaattatgcaagagagggtatccaatttatgaagtctcaagcact

gaaggtgaaggaaacccctacttacaaggagacaatggacactgtgacggactatgtaaagaaattcatggaggcgctg

gcagacagtaaagaagacatcataaaatatgggctgtgggggacgcacacagccttatataagagcatcagtgccaggc

ttgggggtgagactgcgttcgctaccctggtagtgaagtggctggcatttgggggtgaatcaatagcagaccatgtcaaac

aagcggccacagacttggtcgtttactatatcatcaacagacctcagttcccaggagacacggagacacaacaagacgga