[发明专利]一种可吸收的载骨诱导多肽微球及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医用材料技术领域，尤其是涉及一种制备简单，生物相容性好，可吸收的具有骨诱导活性多肽缓释功能的微球及其制备方法。

背景技术

骨缺损一直是骨科面临的一个难题。近年来，通过在骨修复材料上复合骨生长因子越来越受到各国学者的关注，已成为当今生物材料的研究热点之一。

骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins，BMP）属于转化生长因子β超家族成员，是一种多功能的细胞生长因子，BMP具有促进骨折愈合的能力，缩短了骨折的愈合周期。目前国内外对BMP在临床的骨诱导作用给予了很高的评价。其中BMP-2是最主要的骨形成调控因子之一。但天然BMP-2数量有限，且生活活性难以发挥。按BMP-2核心功能区氨基酸序列合成的含1条24个核苷酸的短肽——BMP-2活性多肽，相关研究表明BMP-2活性多肽具有良好的诱导成骨能力。然而BMP-2活性多肽在体内容易扩散稀释，利用度低。

为了更好的发挥BMP-2活性多肽的生物学功能，实现其在骨修复部位的持续缓慢释放，本发明以水溶性壳聚糖为载体材料，制备具有BMP-2活性肽控释功能的壳聚糖微球，从而为骨修复领域提供具有生长因子控释功能的载体系统。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备简单，生物相容性好，效果显著的可吸收的载骨诱导多肽微球。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种可吸收的载骨诱导多肽微球，包括水溶性壳聚糖载体和BMP-2活性多肽。水溶性壳聚糖载体和BMP-2活性多肽的重量比为0.1～1000：1。

更优的方案是：所述的水溶性壳聚糖为羧甲基壳聚糖、山梨酰壳聚糖、对氨基苯甲酰壳聚糖等的一种。

本发明的另一目的在于提供一种可吸收的载骨诱导多肽微球的制备工艺。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

步骤一：将0.1g～10g水溶性壳聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A；

步骤二：将0.01g～5g BMP-2活性多肽加入溶液A中，机械搅拌至混合均匀得到混合溶液B；

步骤三：将5ml~20ml混合溶液B加入含2％（质量分数）乳化剂 斯盘-80（Span80）的液体石蜡溶液100mL中，室温下机械搅拌2h，然后向其中滴加5ml~50mL 5％（质量分数）的三聚磷酸钠（TPP）水溶液，使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕，继续搅拌2h。沉淀，石油醚、异丙醇反复漂洗，最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽（BMP-2活性多肽）微球。

本制备方法配方简单，制备工艺易行。在24个小时内，即可制备，制备简单，生物相容性好。并具有低温、低真空、低能耗、低污染的特点。符合“软加工”（Soft Processing）方式进行材料的合成要求。本发明方法制备的微球形态上呈规则球形，粒径分布在10～100μm，体外降解实验发现生长因子呈持续缓慢释放，制备工艺对活性肽的生物学功能没有显著影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明：

实施例1

步骤一：将1g羧甲基壳聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A；

步骤二：将0.1g BMP-2活性多肽加入溶液A中，机械搅拌至混合均匀得到混合溶液B；

步骤三：将20ml混合溶液B加入含2％（质量分数）乳化剂 斯盘-80（Span80）的液体石蜡溶液100mL中，室温下机械搅拌2h，然后向其中滴加10mL 5％（质量分数）的三聚磷酸钠（TPP）水溶液，使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕，继续搅拌2h。沉淀，石油醚、异丙醇反复漂洗，最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽（BMP-2活性多肽）微球。

实施例2

步骤一：将2g羧甲基壳聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A；

步骤二：将0.1g BMP-2活性多肽加入溶液A中，机械搅拌至混合均匀得到混合溶液B；

步骤三：将20ml混合溶液B加入含2％（质量分数）乳化剂 斯盘-80（Span80）的液体石蜡溶液100mL中，室温下机械搅拌2h，然后向其中滴加25mL 5％（质量分数）的三聚磷酸钠（TPP）水溶液，使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕，继续搅拌2h。沉淀，石油醚、异丙醇反复漂洗，最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽（BMP-2活性多肽）微球。

实施例3