[发明专利]多肽合成卡贝缩宫素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种卡贝缩宫素（Carbetocin）的制备方法，具体涉及多肽合成卡贝缩宫素的制备方法。

背景技术

中文名：卡贝缩宫素，醋酸卡贝缩宫素

英文名：Carbetocin

CAS号：37025-55-1

分子式：C₄₅H₆₉N₁₁O₁₂S

结构式：

由加拿大辉凌制药有限公司开发的预防和控制妇女剖宫产后出血的妇科新药——卡贝缩宫素日前在我国上市，为预防和控制孕妇产后出血提供了新的选择。

卡贝缩宫素是一种全新合成的九肽结构长效催产素受体激动剂，肌肉或静脉注射均可。经北京协和医院、北京大学第一附属医院和北京妇产医院共同完成的临床试验表明，该药与传统的催产素连续滴注控制选择性剖宫产术后出血相比，术后24小时出血量无明显差异，术中、术后总出血量也没有显著性差异；在需要额外使用催产素及其他帮助子宫收缩措施的比例方面，两组没有显著性差异；两组均未发现严重不良事件。

ZL200910106889.0号中国发明专利公开了一种固相制备卡贝缩宫素的方法，以氨基树脂为启始原料，依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，最后一个氨基酸接有Br-(CH₂)₃COOH，因溴代烷非常活泼，易与NH₂-等亲核试剂发生“卤代烃的亲核取代反应”，不容易发生-COOH与NH₂-的定向缩合反应，推广应用有困难。

发明内容

本发明的目的是公开一种固相多肽合成卡贝缩宫素的制备方法，以克服现有技术存在的缺陷。

本发明的技术方案包括以下步骤：

（1）以Rink Amide MBHA树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，依次连接氨基酸，其中Cys采用Fmoc-Cys(CH₂CH₂CH₂COOR)-OH，此处R可以是-Trt基、-tBu基、-Acm基或-Bzl基；最后一个氨基酸使用Fmoc-Tyr(Me)-OH；所述Rink Amide MBHA树脂为一种常用的氨基树脂，可采用市售产品，如天津南开和成科技有限公司的产品；

（2）以TFA/HCl/TIS/HAc为切肽试剂，将多肽从树脂上切落；

（3）以乙醚为溶剂，沉淀并收集直链肽粗品；

（4）用BOP/HOBt/DMF进行成环反应；

（5）将直链肽粗品溶于水，通过制备型HPLC进行分离纯化，填料为C18，流动相采用硫酸铵水溶液和乙腈的混合溶液；检测波长为280nm，获得目标产物。总收率可达到35%以上。

按照本发明，以Rink Amide MBHA树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，依次连接氨基酸的方法包括以下步骤：

Fmoc-Amide-MBHA-Resin

↓ ①20％PIP，②Fmoc-Gly-OH/HBTU/HOBt

Fmoc-Gly-Resin

↓ ①20％PIP，②Fmoc-Leu-OH/HBTU/HOBt

Fmoc-Leu-Gly-Resin

↓ ①20％PIP，②Fmoc-Pro-OH/HBTU/HOBt

Fmoc-Pro-Leu-Gly-Resin

↓ ①20％PIP，②Fmoc-Cys(CH₂CH₂CH₂CO₂R)-OH/HBTU/HOBt

Fmoc-Cys(CH₂CH₂CH₂CO₂R)-Pro-Leu-Gly-Resin

↓ ①20％PIP，②Fmoc-Asn(Trt)-OH/HBTU/HOBt

Fmoc-Asn(Trt)-Cys(CH₂CH₂CH₂CO₂R)-Pro-Leu-Gly-Resin

↓ ①20％PIP，②Fmoc-Gln(Trt)-OH/HBTU/HOBt