[发明专利]人瘤变的上皮增殖性或间充质侵袭性表型的新标记

说明书

背景技术

本发明已经被授予由UIBM经济发展部在2010年4月30日颁发的国外申请许可，案号40718。 

本发明涉及新的Ena/VASP蛋白同工型、其用途、诊断方法及包含它们的试剂盒。 

肿瘤病灶的癌发生和发展以不同的基因表达图谱为特征。这些表达图谱由不同的剪接变体定义，并且特别地，择一性剪接事件经常影响控制肿瘤细胞中的细胞骨架组构的基因(Wang GS,Cooper TA.2007；Gardina PJ等人,2006)。 

已经报道，控制肌动蛋白细胞骨架动力学的调节途径在癌细胞中下调，并且经常出现控制肌动蛋白聚合的蛋白质的表达的改变，从而影响肿瘤细胞的生长、存活和迁移(Olson MF，Sahai E.Clin Exp Metastasis.2009)。 

不幸的是，尽管对癌发生的分子机制的理解取得了进展，但是没有能够预测人类患者中肿瘤病灶的临床进展的分子标记或病理预后标准。 

可激活/血管舒张剂刺激磷蛋白(Ena/VASP)是控制细胞形状、运动且尤其是肌动蛋白组构的关键调节分子。这些蛋白质靶向F-肌动蛋白网络并且在多种细胞类型和生物的细胞迁移方面发挥重要作用。 

Ena/VASP蛋白的特征在于，介导胞内定位的高度保守的N端EVH1结构域、与G-肌动蛋白结合蛋白profillin相互作用的富含脯氨酸的中心结构域、信号传导蛋白的SH3和WW结构域以及Ena/VASP蛋白藉此四聚化的C端EVH2结构域，所述C端EVH2结构域还拥有功能性F-肌动蛋白结合结构域。 

Ena/VASP蛋白参与基于肌动蛋白的细胞(如成纤维细胞)运动(Bear JE等人,2002)，参与细胞粘附(Scott JA等人,2006)。 

Ena/VASP蛋白可以在钙黏着蛋白-粘性接触处调节肌动蛋白组构的不同模式，并且精细调节它们的表达是准确的肌动蛋白网络所必需的。 

Mena是Ena/VASP家族的成员，所述Ena/VASP家族包括Mena、VASP 和Evl，它们均是肌动蛋白动力学的关键调节物(Krause M等人,2003)。对特异于存活期长的乳腺癌患者的自体肿瘤表达的所述分子的抗体库的分析，已经分离出Mena的人直向同源物(hMena)并将其作为在癌症患者中但不在健康供体中刺激抗体应答的肿瘤抗原(Di Modugno等人,2004)。 

在人中(Urbanelli L等人,2006)和在鼠模型中(Gertler F等人,1996)均已经描述了多种Mena剪接变体，将其进行了测序并且一些剪接变体已经与特定的组织表达图谱相关联。在小鼠中描述了一种神经元(N-Mena)形式，其拥有较长的外显子6，所述外显子6在蛋白质水平包含较大的脯氨酸富含区(Gertler F等人,1996)，然而已经报道了一个衍生自缺少脯氨酸富含区的同工型的剪接变体是脾特异性的(Tani K等人,2003)。 

Mena在小鼠和大鼠侵袭性乳腺癌细胞中上调(Wang等人,2007)，在人乳腺癌组织中过量表达，它在乳腺癌组织中是乳腺癌的早期标记(Di Modugno等人,2006)。 

最近，体内侵袭测试方法已经使得能够鉴定鼠和大鼠肿瘤细胞中的侵袭特异性剪接变体(Goswami S等人,2009；Philippar等人,2008)。 

在人体中，之前已经报道了hMena和来自管腔乳腺癌细胞系的剪接变体hMena11a的分子克隆。这种hMena+11a同工型在该蛋白质的EVH2结构域中包含额外的21氨基酸肽，在EGF和NRG1处理后磷酸化并且表现乳腺癌细胞系的上皮表型(Di Modugno F等人,2007)。 

用hMena11a同工型表达表征胰腺癌细胞系，所述胰腺癌细胞系显示上皮标记E-钙黏着蛋白表达、EGFR依赖性和对厄洛替尼治疗敏感(Pino MS等人,2008；和专利WO2009150494)。最近已经报道这种同工型表达受上皮剪接调节蛋白1和2(ESRP1和ESRP2)(上皮细胞类型特异性剪接程序的协调者)(Warzecha CC等人,2009)调节。