[发明专利]重组病毒载体的结构及其制备

权利要求书

1.一种在生产含有一个或多个病毒基因缺陷的复制缺陷型重组病毒载体过程中消除或减少具有复制活力病毒形成的方法，该方法步骤如下：

以基因组中含有一个或多个反式因子或其变体基因编码的携带病毒感染宿主细胞，该携带病毒是一种具有把其基因组维持在宿主细胞质内的能力的细胞质病毒，该携带病毒所含的一个或多个反式因子能提供重组病毒载体生产所需的一个或多个互补功能，其所含的一个或数个反式因子包含复制缺陷型重组病毒载体的结构蛋白；

培养感染的宿主细胞一段合适的时间；

分离所述复制缺陷型重组病毒载体；

所述宿主细胞含有重组病毒的基因组，并将重组病毒基因组保留于其细胞核内。

2.如权利要求1所述的方法，所述携带病毒含有二或多个所述复制缺陷型重组病毒载体的结构蛋白基因，并以合适比例表达该二至多个结构蛋白基因，从而有利于复制缺陷型重组病毒产生。

3.如权利要求1所述的方法，其所述细胞质病毒为痘苗病毒或水疱性口炎病毒（VSV）。

4.如权利要求1所述的方法，其复制缺陷型重组病毒载体为细小病毒科的病毒载体。

5.如权利要求1所述的方法，其复制缺陷型重组病毒载体为重组腺病毒载体。

6.如权利要求1所述的方法，其复制缺陷型重组病毒载体为单纯疱疹病毒载体。

7.一种生产基因组中含有一个或多个病毒基因缺陷的复制缺陷型重组病毒载体方法，该方法步骤如下：

以基因组中含有一个或多个反式因子或其变体基因编码的携带病毒感染宿主细胞，该携带病毒是一种具有把其基因组维持在宿主细胞质内的能力的细胞质病毒，该携带病毒所含的一个或多个反式因子能提供重组病毒载体生产所需的一个或多个互补功能；

培养感染的宿主细胞一段合适的时间；

分离所述复制缺陷型重组病毒载体；

所述宿主细胞含有重组病毒的基因组，并将重组病毒基因组保留于其细胞核内。

所述复制缺陷型重组病毒载体包含自腺病毒科、疱疹病毒科、嗜肝DNA病毒科以及重组病毒和重组微小病毒载体。

8.如权利要求7所述的方法，其复制缺陷型重组病毒载体为重组腺病毒载体。

9.如权利要求7所述的方法，其复制缺陷型重组病毒载体为重组单纯疱疹病毒载体。

10.如权利要求7所述的方法，其复制缺陷型重组病毒载体为重组微小病毒载体。

11.如权利要求7所述的方法，其载体病毒为痘苗病毒或水疱性口炎病毒（VSV）。

12.一种生产基因组中含衣壳蛋白基因缺陷的复制缺陷型重组AAV载体的方法，该方法步骤如下：

使用一种或多种携带病毒感染宿主细胞，所述携带病毒为细胞质病毒，所述携带病毒具有二或多个AAV衣壳蛋白基因编码，并将这二或多个AAV衣壳蛋白在细胞质内以合适比例表达从而有利于生产复制缺陷型重组AAV载体。

培养感染的宿主细胞一段合适的时间；

分离复制缺陷型重组AAV载体；

所述的宿主细胞含有重组AAV基因组，并将其基因组保留于其细胞核内。

13.如权利要求12所述的方法，其二个或多个AAV衣壳蛋白在痘苗病毒p7.5启动子的调控下表达。

14.如权利要求12所述的方法，其二个或多个AAV衣壳蛋白包括来自一个痘苗病毒表达的VP2和VP3以及另一个痘苗病毒表达的VP1。

15.如权利要求12所述的方法，其感染为使用单个痘苗病毒感染宿主细胞。，该痘苗病毒以利于产生复制缺陷型AAV载体的比例表达AAV VP1、VP2和VP3。

16.如要权利求15所述的方法，其单个痘苗病毒含有一个在痘苗病毒p7.5启动子调控下的AAV vp1基因表达框以及另一个在别的痘苗病毒p7.5启动子调控下的AAV vp2基因表达框。