[发明专利]SORF构建体和多基因表达

权利要求书

1.用于产生一种或多种重组蛋白产物的分离的或纯化的表达载体，所述表达载体包含单个开放读码框插入物；所述插入物包含：

(a)编码信号肽的信号肽核酸序列；

(b)编码第一多肽的第一核酸序列；

(c)编码第一蛋白切割位点的第一插入核酸序列，其中所述第一蛋白切割位点由火球菌属的lon蛋白酶基因的内含肽区段、或火球菌属或甲烷球菌属的klbA基因的内含肽区段、或源自它们的修饰的内含肽区段提供；和

(d)编码第二多肽的第二核酸序列；

其中所述编码所述第一蛋白切割位点的第一插入核酸序列可操作地位于所述第一核酸序列和所述第二核酸序列之间；

其中所述编码所述信号肽的信号肽核酸序列可操作地位于所述第一核酸序列之前；且

其中所述表达载体能够表达单个开放读码框多肽，所述多肽可在所述第一蛋白切割位点处被切割。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其中所述第一蛋白切割位点由下述内含肽区段提供：Pyrococcus abyssi、激烈火球菌或掘越氏火球菌OT3的lon蛋白酶基因的内含肽区段；或Pyrococcus abyssi、激烈火球菌或詹氏甲烷球菌的klbA基因的内含肽区段；或分别源自它们的修饰的内含肽区段。

3.根据权利要求1所述的表达载体，其中所述内含肽区段或修饰的内含肽区段编码倒数第二位残基，所述残基是赖氨酸、丝氨酸或不是组氨酸。

4.根据权利要求1所述的表达载体，其中所述内含肽区段或修饰的内含肽区段能够被切割，但是不能使所述第一多肽与所述第二多肽完全相连。

5.根据权利要求1所述的表达载体，其中所述第一蛋白切割位点是由下述内含肽区段提供：包含选自SEQ ID NO：1、3、4、6、7、55、35、37和39的序列的内含肽区段，和源自它们的修饰的内含肽区段。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽和第二多肽能够多聚装配。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽和第二多肽中的至少一种能够胞外分泌。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽和第二多肽中的至少一种具有哺乳动物起源。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽包含免疫球蛋白重链或其功能片段，且所述第二多肽包含免疫球蛋白轻链或其功能片段，且所述第一多肽是在所述第二多肽的上游。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的表达载体，所述载体仅包含一个所述信号肽核酸序列。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的表达载体，所述表达载体另外包含编码第三多肽的第三核酸序列和编码第二蛋白切割位点的第二插入核酸序列；其中所述第二插入核酸序列和第三核酸序列以该次序可操作地位于所述第二核酸序列之后。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽和所述第二多肽包含功能抗体或其它抗原识别分子；其中抗原特异性指向结合选自下述的抗原：TNFα(肿瘤坏死因子-α)、促红细胞生成素受体、RSV、EL/选择蛋白、白介素-1、白介素-12、白介素-13、白介素-18、白介素-23、白介素-33、CD81、CD19、IGF1、IGF2、EGFR、CXCL-13、GLP-1R、前列腺素E2和淀粉样蛋白β。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽和第二多肽包含一对免疫球蛋白链，它们来自D2E7、EL246、ABT-007、ABT-325或ABT-874的抗体。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的表达载体，其中所述第一多肽和第二多肽各自独立地选自：免疫球蛋白重链或免疫球蛋白轻链区段，它们来自D2E7、EL246、ABT-007、ABT-325、ABT-874或其它抗体的类似区段。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的表达载体，其中所述载体另外包含所述插入物的启动子调控元件。

16.根据权利要求15所述的表达载体，其中所述启动子调控元件是诱导型或组成型。