[发明专利]糖基化重复基序分子缀合物

说明书

本文报道了GEMOC（糖基化重复基序分子缀合物），其是重组生产的并包括体内糖基化，即来自表达EMOC（重复基序分子缀合物）的细胞类型的糖基化，以及生产这类聚合物的方法和这类聚合物的用途。

发明背景

已开发了不同的重复基序分子作为经典抗原结合分子（例如免疫球蛋白）的备选物提供。

示例性的重复基序分子是设计的锚蛋白重复蛋白（DARPins）。DARPins可以以功能性形式在大肠杆菌菌株的细胞质中表达。DARPins的重复基序包括33个残基的氨基酸序列。重复包括β转角基序和其后的一对反向平行α-螺旋和导致下一个重复折返的环。锚蛋白重复基序分子中一般存在1至30个以上的重复基序，最常见是4至6个。

Kohl等人（Kohl,A.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 100(2003)1700-1705）基于对约2000个天然存在的锚蛋白重复序列的比对开发了人工的锚蛋白重复模块。该人工的共同锚蛋白重复序列包括27个固定的氨基酸残基和6个可变的氨基酸残基，形成（一部分的）结合位点（Forrer,P.等人，ChemBioChem 5(2004)183-189）。

为了获得DARPins与预定靶分子的结合，将人工的共同锚蛋白重复序列的可变氨基酸残基随机化，通过核糖体展示鉴别特定的结合子（参见例如，WO 02/020565；Hanes,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94(1997)4937-4942）。

在US 2009/0148905中报道了抗原结合构建体。WO 2008/135237中报道了补体因子H衍生的短共同重复抗体构建体。WO 2007/122511中报道了抗体-RNA酶-缀合物。US 2008/0206201中报道了包含重组核酸的新城病病毒，当通过感染病毒的肿瘤细胞表达时，核酸编码的结合蛋白具有治疗活性。在US 2008/0248026中，报道了PTEN/AKT方法和涉及BMP的组合物。WO2005/076902和US 2008/0103098中报道了以二硫键桥接的双链形式重组表达的蛋白质。WO 2009/068649中报道了抗原结合构建体。

发明概述

本文报道了糖基化形式的重复基序分子缀合物，即，在哺乳动物细胞中表达的。

因此，本文报道的第一个方面是下列通式的糖基化重复基序分子缀合物：

(重复基序分子-接头_n)_m-(缀合部分)_q-(接头_o-重复基序分子)_p

其中n和o是彼此独立的0或1的整数值，并且独立于m和p和q的各个值，且m和p是彼此独立的整数值0或1或2或3或4或5或6或7，且q是0或1的整数值，独立于n、m、o和p，

其中重复基序分子缀合物包括至少一个与糖基化位点连接的寡糖，

且其中至少m=q=1或p=q=1。

在一个实施方案中，重复基序分子是锚蛋白-重复基序分子或富含亮氨酸的重复基序分子。在其他实施方案中，锚蛋白-重复基序分子具有SEQ ID NO:4或其变体的氨基酸序列。在另一个实施方案中，接头是选自SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:33的肽接头。在一个实施方案中，缀合部分（partner）是多聚的缀合部分。在仍然其他的实施方案中，多聚的缀合部分选自天然的或改造的成对重链CH2和CH3结构域、选自天然的或改造的成对重链CH1结构域和轻链恒定结构域、选自天然的或改造的重链铰链区，选自重链铰链区和CH2和CH3结构域的天然的或改造的序列、选自亮氨酸拉链结构域、选自异亮氨酸拉链结构域、选自4-螺旋束和选自p53四聚结构域，或选自其组合。

在一个实施方案中，根据本发明的缀合物的特征是具有通式：

((重复基序分子-接头_n)_m-(缀合部分)_q-(接头_o-重复基序分子)_p)_r

其中

i)n=1、m=1、q=1、p=0、r=1，或

ii)n=1、m=1、q=1、p=0、r=2，或