[发明专利]用于分离和处理自身免疫性T细胞的拟肽配体

说明书

本申请要求2009年5月29日提交的美国临时专利申请编号61/182,368和2009年11月12日提交的编号61/260,608的优先权，以上每篇文献以其整体作为参考并入本文。

本发明是在国家心肺和血液研究所的资助号No.NO1-HV28185以及国家健康研究所的资助号No.DP10D00066301的政府支持下进行的。政府对本发明具有一定的权利。

发明背景

1.发明领域

本发明一般性地涉及分子生物学、免疫学和医学领域。更具体地，它涉及对被自身免疫性T细胞所识别的拟肽的鉴定。这些拟肽可用于鉴定患有自身免疫病或具有患自身免疫病风险的对象，以及可用于靶向这些细胞以进行去除、抑制或破坏。

2.相关技术的说明

多种自身免疫病的分子基础仍是未知的。部分地由于此分子水平上认识的缺乏，开发自身免疫病诊断试剂和有效治疗的现有技术远未达到最佳。例如，尚没有用于诊断大部分自身免疫病的高度可靠的血清蛋白标志物。几乎没有例外，用于治疗这些病况的药物，或者是抑制自身免疫反应本身的下游事件(如炎症)，或者是非选择性地试图调节或抑制整个免疫系统(Hemmer & Hartung，2007)，其具有显著的不希望的副作用。对于诊断和治疗应用，理想地，希望具有下述分子：直接靶向自身反应性B细胞(和它们所产生的抗体)和T细胞，但忽略识别外源抗原的B和T细胞。这些分子可用作诊断剂和研究工具，用以检测和富集自身免疫抗体、B细胞和T细胞。另外，这些分子可用作新药物开发项目的基础，其目的在于消除这些自身反应性细胞而不影响免疫系统的正常功能。

因此，对于这些疾病来说，仍需要(i)准确并且客观，(ii)简单并且可重复，和(iii)在早期和晚期事件中均有用的诊断过程。

发明简述

本发明提供了使用合成分子的方法，所述合成分子即作为特定生理状态之生物标志物的与配体结合部分(如复杂生物混合物中所存在的蛋白质、核酸、碳水化合物或非粘附细胞)相结合的配体。在某些方面，所述配体为拟肽。

因此，根据本发明，提供了鉴定被自身免疫性T细胞所特异性识别的配体或拟肽的方法，其包括(a)提供来自健康对象的第一T细胞群，其中所述群由第一可检测标记物所标记；(b)提供来自患自身免疫病对象的第二T细胞群，其中所述群由第二可检测标记物所标记；(c)将所述第一和第二T细胞群与多个所述候选拟肽相接触；和(d)评价所述第一和第二T细胞群与所述候选拟肽的结合，其中如果所述拟肽与所述第二T细胞群结合但是不与所述第一T细胞群结合，则自身免疫细胞识别所述拟肽，而健康T细胞不识别。

所述自身免疫病可以是多发性硬化或类风湿性关节炎。所述配体或拟肽可以是3聚体、4聚体、5聚体、6聚体、7聚体、8聚体、9聚体或10聚体。所述第一和第二标记物可以是发荧光的或化学发光的，或量子点。所述拟肽可以与支持物结合，如珠、芯片、滤器、蘸棒(dipstick)、膜、聚合物基质或孔。所述接触步骤可包括使所述支持物与所述第一和第二T细胞群同时接触。所述T细胞群可包括CD4+T细胞。所述对象可以是人或鼠。

在另一个实施方案中，提供了从患有自身免疫病的对象中除去自身免疫性T细胞的方法，其包括(a)提供与自身免疫性T细胞特异性结合的配体或拟肽，其中所述配体或拟肽与支持物结合；(b)将来自所述对象的含有T细胞的样品与所述结合支持物的拟肽接触足够的时间以允许自身免疫性T细胞与所述结合支持物的配体或拟肽结合；和(c)将所述支持物与所述样品分离。该方法还可以包含将步骤(c)的样品返回到所述对象。自身免疫病可以是多发性硬化或类风湿性关节炎。

配体或拟肽可以是3聚体、4聚体、5聚体、6聚体、7聚体、8聚体、9聚体或10聚体。支持物可以是珠、芯片、滤器、蘸棒、膜、聚合物基质或孔。所述样品可以是血液、脑脊液或精液。在样品为血液时，它可得自所述对象、经离体处理并返回到所述对象，以及另外，可在闭合回路中将血液灌注通过所述结合支持物的配体或拟肽并返回至所述对象。所述方法还可包括从所述对象获得所述样品。对象可以是人或鼠。