[发明专利]产生L-氨基酸的微生物和利用其生产L-氨基酸的方法

说明书

发明背景

1.发明领域

本发明涉及具有蔗糖可同化性(sucrose assimilability)和L-氨基酸产生能力的属 于埃希氏菌属某种(Escherichia sp.)的微生物，其通过将编码从蔗糖同化微生物得到 的蔗糖代谢酶的基因引入具有L-氨基酸产生能力和蔗糖PTS(磷酸烯醇丙酮酸依赖 的蔗糖磷酸转移酶系统)活性的属于埃希氏菌属某种的非蔗糖同化微生物中而获 得；以及利用所述微生物产生L-氨基酸的方法。

2.相关领域的说明

由于对生物燃料生产日益增长的需求以及由不正常的气候引起的农业欠收， 主要用于工业发酵的淀粉糖的价格增长快速。可选地，蔗糖或含有高浓度蔗糖的 糖蜜——比淀粉糖便宜——作为碳源在工业发酵中的使用对于保证成本竞争是 有利的。

大约50％的野生型天然形成的大肠杆菌(E.coli)能够代谢蔗糖，但是通常用于 工业发酵的大肠杆菌K12菌株、B菌株、C菌株或类似物没有同化蔗糖的能力(Mol. Microbiol.(1998)2：1-8，Can.J.Microbiol.(1999)45：418-422)。因此，发酵工业的最 重要的挑战之一是鉴别涉及蔗糖同化作用的基因，通过改进而建立提高的蔗糖同 化作用相关基因以及将该基因应用到非蔗糖同化的工业大肠杆菌菌株中，以产生 期望的代谢物。

为了赋予工业大肠杆菌菌株蔗糖可同化性，引入涉及蔗糖同化作用的基因或 基因簇——得自具有蔗糖可同化性的微生物——的方法已被普遍使用。例如，通 过用存在于属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的沙门氏菌属(Salmonella)某种(J. Bacteriol.(1982)151：68-76，Mol.Microbiol.(1998)2：1-8，J.Bacteriol.(1991) 173：7464-7470，美国专利号7179623)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)(J. Gen.Microbiol.(1988)134：1635-1644)和解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)(J. Bacteriol.(2000)182：5351-5358)中的scr调节子转化而赋予大肠杆菌K12蔗糖可 同化性的方法在本领域中是悉知的。得自具有蔗糖可同化性的非K12大肠杆菌或 致病大肠杆菌的csc调节子(Appl.Environ.Microbiol.(1992)58：2081-2088，美国专 利号6960455)的引入、存在于分离自大肠杆菌ABl281的接合质粒scr53中的涉 及蔗糖同化作用的基因簇(美国专利号4806480)的引入，以及得自革兰氏阳性微生 物、变异链球菌(Streptococcus mutans)(J.Bacteriol.(1989)171：263-271)和枯草杆菌 (Bacillus subtilis)(J.Bacteriol.(1989)171：1519-1523)的scr调节子和sac操纵子的 引入也是已知的。美国专利号7179623公开了利用大肠杆菌K12产生赖氨酸、异 亮氨酸和缬氨酸的方法，所述大肠杆菌K12通过在其中引入从大肠杆菌VKPM  B-7915得到的scr调节子而被制备。

然而，仍然需要具有有效的蔗糖利用系统的工业微生物和利用其进行发酵的 方法。因此，本发明人发现，可以利用属于埃希氏菌属某种的产生L-氨基酸的微 生物从蔗糖中以高产量生产L-氨基酸，所述微生物通过引入得自蔗糖同化的肺炎 克雷伯氏菌的涉及蔗糖同化作用的基因簇而被制备，从而完成本发明。

发明概述

本发明的一个目的是提供具有蔗糖可同化性和L-氨基酸产生能力的属于埃希 氏菌属某种的微生物，所述微生物通过赋予具有L-氨基酸产生能力的属于埃希氏 菌属某种的非蔗糖同化微生物蔗糖可同化性而被制备。

本发明的另一个目的是提供这样一种方法：其利用具有蔗糖可同化性和L-氨 基酸产生能力的属于埃希氏菌属某种的微生物，从蔗糖中生产L-氨基酸。

附图简介

图1显示根据本发明的一个具体实施方式的含有从肺炎克雷伯氏菌 (ATCC700721)得到的scrKYABR的重组质粒pAscrKP的构建。

发明详述