[发明专利]一种3′-唾液酸乳糖的制备方法

权利要求书

1.一种产3′-唾液酸乳糖的菌株，分类命名为大肠杆菌（Escherichia coli）K235 WXJYL-11，已经在中国典型培养物保藏中心进行专利保藏，保藏编号CCTCC NO：M208088。

2.用权利要求1所述菌株发酵制备3′-唾液酸乳糖的方法，其特征在于工艺为：

（1）高密度培养：以大肠杆菌CCTCC NO：M208088为出发菌种，在发酵罐中添加发酵培养基，接种量为4%，整个发酵过程维持温度30-37℃，通气量1-1.5 vvm，搅拌转速为600-800 r/min；在发酵过程中流加碱液氨水控制pH为6-7，发酵周期为32-48小时；发酵2-6小时后开始添加补料培养基，直至发酵结束前半小时停止添加，添加补料培养基的体积数与发酵培养基的体积数相当，以均速加入发酵体系内；

发酵培养基成分g/L：山梨醇 30，乳糖20，硫酸铵2.5，三水合磷酸氢二钾 2.5，MgSO₄ 0.9，胰蛋白胨 1.5；

补料培养基成分g/L：山梨醇 400，硫酸铵 50；

（2）流加乳糖：配置10-20g/L的乳糖溶液；在发酵16-20小时后，以发酵体系计0.5-5 g/L的恒定速率向发酵罐中流加乳糖溶液直至发酵结束前5-10小时停止流加；

（3）离心除菌：发酵结束后，取步骤（2）所得发酵液80℃加热处理30分钟，然后以6000 rpm离心10分钟除去菌体，得到含有唾液酸乳糖的上清液1和菌泥；

（4）菌体加热裂解：将步骤（3）所得菌泥加水稀释3～5倍，沸水浴加热45-60分钟，然后以10000rpm离心10分钟除去细胞碎片，得到含有唾液酸乳糖的上清液2；

（5）离子交换树脂吸附和脱吸：将步骤（3）所得上清液1和步骤（4）所得上清液2合并，加热至80-90℃，恒温加热15分钟；用截留分子量1000Da的膜进行超滤，收集滤出液；用截留分子量500Da超滤膜处理滤出液，收集处理后的截留液；将截留液通入阳离子交换树脂柱，用水洗脱，把培养基中的乳糖和产物3′-唾液酸乳糖分开，收集富含3′-唾液酸乳糖的洗脱液；

（6）真空干燥：将步骤（5）所得洗脱液进行真空浓缩，然后再进行喷雾干燥，即获得产品3′-唾液酸乳糖。

3.根据权利要求1所述3′-唾液酸乳糖的制备方法，其特征在于步骤（5）所述阳离子交换树脂为Diaion UBK 530，即酸磺化聚苯乙烯-二乙烯基苯Na型或K型树脂。